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肝癌核心家系和对照核心家系标本库的建立及其血清学检测分析

作　者: 聂龙
导　师: 崔英
学　校: 广西医科大学
专　业: 肿瘤学
关键词: 肝癌核心家系对照核心家系标本库遗传易感性
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

研究背景:我国肝癌年发病30.6万,死亡30万,占全世界肝癌死亡人数的54.6%,死亡率列各大肿瘤死亡率的第二位,在农村仅次于胃癌,在城市仅次于肺癌。同时肝癌因为恶性程度高,病人自然生存期短,已经成为威胁我国人民健康的一大疾病。我国肝癌发病率高的一个最主要原因是因为我国属HBV感染高流行区,一般人群的HBsAg阳性率为9.09%。广西是乙肝病毒的高流行区,1992年全国乙肝流行病学调查显示,广西乙肝表面抗原阳性率约为13%。同时,广西也是全国的一个肝癌高发区,其中以扶绥县肝癌发病率最高。以往对PLC病因的研究仅限于传统流行病学,主要发现PLC的高发与慢性乙肝病毒(HBV)感染、黄曲霉毒素B1(AFB1)摄入、长期过量饮酒、吸烟等有关。近十年来该领域未能再获新的重要突破,传统流行病学阐明了环境与疾病的关系,而事实上遗传因素在肝癌的发生发展过程中也发挥了不可忽视的作用。肝癌的发生是多因素、多基因,遗传和环境因素相互作用的复杂过程,深入了解各种环境危险因素的协同作用及其与肝癌易感基因多态性的关系,将会对肝癌致病机制的研究更深一步。目前国内外关于肝癌遗传易感性的研究仍处于起步阶段,并且由于样本量小、存在不同种族和地域的差异,缺乏基因间以及基因与环境交互作用的分析,致使研究结果存在一定程度的分歧。目前肝癌遗传易感性的研究绝大部分集中于对已患肝癌病人进行基因检测和分析,或者对癌组织及癌旁组织相关基因多态性进行对照研究,缺乏对和肝癌先证者有稳定遗传关系的父母进行相关基因的检测及对照。肿瘤易感性是由许多基因不同多态的组合效应所造成的,不同基因不同多态位点的作用是不同的,需要进行基于多个单核苷酸多态性(single?nucleotide?polymorphism,SNP)综合作用的单倍型分析(haplotype?analysis)。因此联合多家肿瘤研究机构及医院共同收集标本,或者建立统一的标本库建立及管理标准,增加样本量,进行汇总分析,是解决当前肝癌遗传易感性研究遇到的难题的方法之一。同时,随着医学研究的深入,人们逐渐认识到高质量的生物样本是决定医学研究速度的重要因素。丰富的、完整的生物样本作为一种宝贵的医学资源,是许多医学科研工作得以开展的保证。我国人口众多、地域广泛、多民族居住,具有丰富的生物医学资源,然而由于观念及认识的差异,我国肿瘤标本库建立较晚。因此,建立肝癌核心家系和对照核心家系标本库,能够为肝癌的遗传易感性研究提供资源保证,有利于缩小我们与发达国家在生物医学研究中的差距,有望为建立具有我国特色、符合我国国情的统一的标本资源库提供参考依据。本研究利用广西地区多民族居住、肝癌发病率高的特点,建立较大样本量的肝癌核心家系标本库及对照核心家系标本库既可以充分发挥地区资源优势,为肝癌的遗传易感性研究提供保障,又可以对核心家系标本库的建立过程及规范管理进行积极探索,为将来更大样本量乃至全国性的标本库的建立或者技术标准的确定提供参考,具有科学性、实用性和创新性。目的:①建立肝癌核心家系和对照核心家系标本库,为肝癌遗传易感性的研究提供实验标本和研究资料;②对肝癌核心家系和对照核心家系进行调查并对其乙肝病毒感染情况进行分析;③对肝癌核心家系和对照核心家系成员进行防癌宣传教育,并对他们进行肝癌筛查;④对肝癌核心家系和对照核心家系标本库建立及管理中存在的问题进行探讨。方法:①原始资料的收集:到医院病案室查询已出院肝癌病人或者到病房查询在院肝癌病人的病历,查询单位体检数据或社区及村庄乙肝筛查资料,对符合肝癌核心家系和对照核心家系研究条件的对象进行接触交流,填写登记表,包括其发病情况、乙肝感染史、癌家族史、家庭住址、联系方式等资料。同时对其及家属进行肝癌病因、诊治及防控等知识的宣传教育。②采集血样:征得肝癌核心家系和对照核心家系先证者及其家属同意后,动员先证者及其血缘父母来我院进行进行乙肝两对半、AFP、肝功能检测及肝脏B超检查,对于一些不便来院的,派人上门调查,采集先证者及其核心家系成员(父母)的外周静脉血液各7ml,其中5ml血液装入有抗凝剂EDTA的真空采血管,2ml血液装入无抗凝剂的普通采血管。③标本检验及处理:2ml非抗凝血进行乙肝两对半、AFP及肝功能(主要是ALT和AST)检测,5ml抗凝血样取回后以2000～2500g离心力离心15分钟后将上层血清及下层的血细胞血小板等分别装入两支冻存管,统一编号后集中存放于-20℃冰柜。④利用EpiData软件将登记表及血样编号等信息录入电脑,对核心家系资料进行信息化管理,专人负责对存放的肝癌核心家系及对照核心家系标本定期检查,记录入库时间、存放位置等。结果:①肝癌核心家系标本库的建立:自2006～2010年共收集肝癌核心家系251例,具备了完整的血样及相关资料,为肝癌遗传易感性的研究奠定了基础。②本研究中,251名肝癌先证者HBsAg阳性率92.03%,再次证实了乙肝病毒感染和肝癌发病的密切关系。调查发现在肝癌核心家系成员中,HBV感染率相当高,753例肝癌核心家系成员中HBsAg阳性率为44.89%(338/753),非先证者的HBsAg阳性率为21.31%(107/502),先证者父亲和母亲HBsAg阳性率分别为12.35%(31/251)、30.29%(76/251);③对肝癌核心家系的调查分析:在251例肝癌核心家系中有肝癌家族史的家系30例,占总数的11.95%,其中15例为先证者的一级亲属(先证者的父母及兄弟姐妹)。通过检测乙肝两对半、AFP及B超检查等对先证者父母进行筛查,结果新发现男性肝癌患者1例,手术后病理提示为肝细胞癌。④对照核心家系标本库初步建立:自2009年5月至2011年4月,共收集对照核心家系168例,血样标本及资料完整。168名对照核心家系先证者表面抗原阳性率为42.86%(72/168),对照核心家系中全部成员表面抗原阳性率为28.17%(142/504),非先证者HBsAg阳性率20.83%(70/336),其中先证者父亲和母亲HBsAg阳性率分别为17.26%(29/168)和24.40%(41/168)。结论:①通过对肝癌核心家系和对照核心家系标本库的建立,充分利用了本地区资源,为下一步肝癌遗传易感性的研究奠定了坚实基础,有望为揭示肝癌遗传易感规律提供更具说服力的证据。②无论是肝癌核心家系还是对照核心家系,先证者母亲乙肝感染率均明显高于其父亲感染率,这是否与母婴传播在乙肝流行病学中起作用相关值得进一步研究。③PLC的一级亲属是肿瘤高风险易感人群,在肝癌核心家系及对照核心家系调查中,我们通过宣传教育提高了这部分高危人群的防癌意识,通过筛查,新发现男性肝癌患者1例,经手术切除病理证实为肝细胞癌。因此,通过对这部份人群的筛查,可以为肝癌的早发现、早诊断、早治疗发挥一定作用。④对核心家系标本库建立过程中遇到的病人心理、伦理社会、管理应用等问题探讨,积累了经验,培养了人才,可以为其他类似课题的开展提供借鉴和参考。

全文目录

主要英文缩写一览表  4-5
摘要  5-10
ABSTRACT  10-16
前言  16-20
资料与方法  20-25
结果  25-29
讨论  29-42
结论  42
总结  42-44
参考文献  44-49
综述  49-60
  参考文献  56-60
附录  60-65
致谢  65-67
攻读硕士期间发表的文章  67

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