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鸡传染性支气管炎病毒不同血清型交互免疫试验研究

作　者: 张宁
导　师: 崔保安；杨连勋
学　校: 河南农业大学
专　业: 兽医
关键词: 传染性支气管炎病毒血清分型交叉免疫试验
分类号: S858.31
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 86次
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内容摘要

鸡传染性支气管炎(Avian Infectious Bronchitis, IB)是目前广泛流行的一种发病快、极易传染的病毒性呼吸道疾病。此病的病原鸡传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus, IBV) ,该病毒属于冠状病毒科、冠状病毒属。从1931年报道于北美以来,现在已经成为世界各地流行的主要禽病,不但会引起鸡只死亡,而且临诊型感染和亚临诊感染均会致使鸡群生产性能下降,饲料报酬降低。该病病原的血清型较多,已达30余种之多,常见的有M41、Conn、Iowa97、Gray、Hotle、JMK、SE17、Clark333、Arkanass99、Florida和Australian T等,并且新的血清型在不断的出现,不同血清型毒株之间仅有部分或无交叉保护作用。IB仍然呈现出高发的流行趋势,尤其是在已免疫鸡群中也常有IB爆发,造成严重的经济损失,从而给IB的防治工作带来困难。因此,根据当地流行毒株的血清型选择疫苗或利用地方分离株制备疫苗,成为当前IB防治工作的重点。本实验利用系统HI交叉实验,对IBV M41、Conn等标准毒株和CH07、RW08等地方分离株的血清分型和抗体区分进行了初步探讨。试验结果证明,Conn株、CH07株、RW08株与M41株的HI效价相差大于2倍,CH07、RW08株与Conn株的HI效价相差同样也大于2倍,根据血清型的判定标准,即:不同毒株与同一抗血清的HI效价相差1～2倍时为同一血清型,可判定CH07株、RW08株的血清型相近,但与M41株血清型、Conn株血清型不同。利用病毒中和试验对不同的毒株进行了血清分型,试验结果表明,IBV分离株CH07株、RW08株在抗原性上与常见的标准毒株存在着很明显的差异,由此可见它们是新的IBV变异株,且在河南省有一定的流行趋势。利用IBV RW08株和M41株分别制备灭活油乳剂,同时制备两毒株的二价灭活油乳剂,分别免疫试验鸡。分别用M41株、CH07和RW08等毒株进行交叉攻毒,二价油乳剂免疫组对M41血清型毒株的攻击起到保护作用的同时也能抵抗RW08血清型毒株的攻击。抗体测定结果表明,IB二价油乳剂免疫组与RW08株、M41株油乳剂单独免疫组相比,抗体水平相当。IB二价灭活油乳剂不仅能够激发机体产生与单独免疫水平相当的抗体,同时又能对不同血清型IBV毒株的攻击产生抵抗,扩大免疫保护范围,减少免疫次数,降低对鸡只的应激,为利用地方分离株进行IB的防制奠定了基础。

全文目录

致谢  4-9
摘要  9-10
1 文献综述  10-23
  1.1 鸡传染性支气管炎概述  10
  1.2 鸡传染性支气管炎国内外研究现状  10-13
    1.2.1 国外流行情况  10-12
    1.2.2 国内流行情况  12-13
  1.3 鸡传染性支气管炎流行病学、临床症状、组织嗜性和病理学特性  13-15
    1.3.1 IB 的流行病学  13
    1.3.2 IB 的临床症状  13-14
    1.3.3 IB 的组织嗜性和病理变化  14-15
  1.4 鸡传染性支气管炎的诊断  15-17
    1.4.1 病原学诊断方法  15
    1.4.2 血清学诊断方法  15-17
      1.4.2.1 琼脂扩散试验(AGPT)  15-16
      1.4.2.2 对流免疫电泳技术(CIE)  16
      1.4.2.3 酶联免疫吸附试验(ELISA)  16
      1.4.2.4 血凝及血凝抑制试验(HA-HI)  16-17
      1.4.2.5 病毒中和试验(VN)  17
      1.4.2.6 免疫胶体金技术  17
      1.4.2.7 斑点免疫金测定法(DIGFA)  17
  1.5 鸡传染性支气管炎病原学研究进展  17-21
    1.5.1 IBV 的生物学分类地位及病毒粒子结构  17
    1.5.2 IBV 的理化特性  17-18
    1.5.3 IBV 的培养特性  18
    1.5.4 IBV 的分型  18-21
      1.5.4.1 IBV 的临床分型  19
      1.5.4.2 IBV 的血清分型  19
      1.5.4.3 IBV 的保护型或免疫型分型  19
      1.5.4.4 IBV 的基因分型  19-21
        ⑴ 序列测定  20
        ⑵ 核苷酸指纹图谱(ONF)分析  20
        ⑶ 血清型特异引物(serotype-specific primers)  20
        ⑷ RT-PCR 和RFLP 技术  20-21
  1.6 鸡传染性支气管炎病毒基因组  21-22
  1.7 鸡传染性支气管炎的免疫预防  22-23
2 引言  23-24
试验一鸡传染性支气管炎病毒地方分离株的血清学鉴定  24-32
  3.1 材料与方法  24-27
    3.1.1 材料  24
      3.1.1.1 毒株  24
      3.1.1.2 主要仪器设备  24
      3.1.1.3 主要试剂  24
      3.1.1.4 鸡胚及SPF 鸡  24
      3.1.1.5 常用溶液  24
    3.1.2 方法  24-27
      3.1.2.1 病毒HI 抗原的制备  25
      3.1.2.2 灭活油乳剂的制备  25
      3.1.2.3 病毒阳性血清的制备  25
      3.1.2.4 血凝抑制交叉试验  25-26
      3.1.2.5 交叉中和试验  26-27
  3.2 结果与分析  27-29
    3.2.1 病毒EID50 的测定  27
    3.2.2 HI 抗原制备  27
    3.2.3 阳性血清的制备  27-28
    3.2.4 HI 交叉试验  28
    3.2.5 交叉中和试验  28-29
  3.3 结论与讨论  29-32
    3.3.1 IBV 的血凝性  29-30
    3.3.2 影响IBV HI 抗原效价的因素  30
    3.3.3 IBV 的血清分型  30-32
试验二鸡传染性支气管炎病毒不同血清型的联合免疫研究  32-38
  4.1 材料与方法  32-33
    4.1.1 材料  32
      4.1.1.1 毒株  32
      4.1.1.2 种蛋及SPF 鸡  32
      4.1.1.3 主要仪器设备  32
      4.1.1.4 主要试剂  32
    4.1.2 方法  32-33
      4.1.2.1 不同毒株联合油乳剂的制备  32-33
      4.1.2.2 试验鸡的免疫  33
      4.1.2.3 油乳剂抗体水平测定  33
      4.1.2.4 免疫交叉保护试验  33
  4.2 结果与分析  33-36
    4.2.1 油乳剂质量检验  33-34
      4.2.1.1 物理性状检验及无菌检验  33-34
      4.2.1.2 安全性检验  34
    4.2.2 抗体水平测定  34-35
    4.2.3 交叉攻毒保护试验  35-36
  4.3 结论与讨论  36-38
    4.3.1 灭活油乳剂的制备  36
    4.3.2 鸡传染性支气管炎的联合免疫  36-38
5 全文总结  38-39
参考文献  39-45
ABSTRACT  45-46

鸡传染性支气管炎病毒不同血清型交互免疫试验研究

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