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全人源抗CCR7噬菌体单链抗体的筛选及初步鉴定

作　者: 樊春波
导　师: 李少林
学　校: 重庆医科大学
专　业: 肿瘤学
关键词: 噬菌体抗体库单链抗体 CCR7 乳腺癌
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 27次
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内容摘要

目的:从噬菌体抗体库中筛选抗CCR7单链融合抗体,并对其性能进行初步检测。方法:PCR检测大肠杆菌中ScFv基因插入率;1%琼脂糖凝胶电泳鉴定Sfi I和Not I双酶切质粒的结果;分别以乳腺癌细胞MDA-MB-435s细胞及CCR7多肽片段为靶抗原对抗体库进行4轮和3轮筛选富集。将阳性克隆转化E.coli HB2151进行可溶表达。抗体亲和层析纯化后,Western-blot结果显示获得抗体相对分子质量为34 kd左右。免疫细胞化学、免疫组织化学检测与放射免疫显像均证实单链抗体与表达CCR7的乳腺癌细胞特异性结合。人工基底膜穿透实验检测131I标记scFv抗体对CCR7抗原表达阳性乳腺癌细胞侵袭能力的影响。结果:ScFv基因插入率为90%(18/20),双酶切鉴定检测到目的条带。经4轮细胞筛选,3轮抗原筛选抗CCR7抗原的噬菌体抗体得到了明显富集,在E.coli HB2151中实现可溶表达。Western-blot结果显示获得抗体相对分子质量为34kd左右。免疫细胞化学、免疫组织化学检测与放射免疫显像均证实单链抗体与表达CCR7的乳腺癌细胞特异性结合。人工基底膜穿透实验显示131I标记scFv抗体可抑制CCR7抗原表达阳性乳腺癌细胞的侵袭能力。结论:利用乳腺癌细胞MDA-MB-435s和CCR7多肽片段为靶抗原,从噬菌体抗体库中筛选获得具有较高特异性的抗CCR7单链抗体。抗体在体内体外均与肿瘤细胞表达抗原特异结合,并在体外可抑制其侵袭作用。

全文目录

英汉缩略语名词对照  5-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
前言  10-11
1 材料和方法  11-26
2 结果  26-29
3 讨论  29-32
结论  32-33
参考文献  33-35
文献综述一  35-42
  参考文献  39-42
文献综述二  42-47
  参考文献  45-47
附图  47-52
致谢  52-53
攻读硕士期间发表的论文  53

全人源抗CCR7噬菌体单链抗体的筛选及初步鉴定

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