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抑制引起腹泻致病菌的益生菌筛选及机制初步研究

作　者: 薛超辉
导　师: 张兰威
学　校: 哈尔滨工业大学
专　业: 食品科学
关键词: 益生菌筛选蛋白质纯化抑制黏附致病性大肠杆菌
分类号: R371
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

腹泻是发展中国家导致儿童死亡的主要原因,每年有大约140万-250万的生命死于腹泻。腹泻除了直接引起健康的损伤外,还引起人体营养失调,生长速度减缓,智力发育等问题。尽管在发达国家腹泻导致死亡的的情况并不经常发生,但是腹泻仍然是引起普通疾病的主要原因,而且还消耗了大量的医疗费用。我们筛选能够抑制引起腹泻致病菌的益生菌,这些益生菌对于预防腹泻发挥重要的作用,益生菌配合药物治疗腹泻既能够使腹泻快速康复,又能够保护肠道菌群免受药物的破坏。用益生菌预防和治疗腹泻还能够有效地降低医疗费用,减轻医疗负担。从健康成人肠道中分离肠道益生菌。采集粪便样本,稀释之后用RB、CAN和LAM培养基分离出39株益生菌,其中15株双歧杆菌、14株乳酸球菌和10株乳酸杆菌。然后以致病性大肠杆菌(E.coli)作为指标菌株对这39株益生菌进行抑菌筛选,发现乳酸球菌对于致病性大肠杆菌没有抑制作用,大部分双歧杆菌和乳杆菌有抑菌作用。对于剩余的具有抑菌能力的益生菌菌液上清进行中和,发现大部分益生菌丧失抑菌能力,仅有三株益生菌具有较强的抑菌活性,最后通过过氧化氢酶试验和蛋白酶检测试验确定1321、0533和1333这三株菌,不仅能够代谢产生各种酸抑菌,还能够产生抗菌肽抑制致病菌的生长。最后通过蛋白质纯化仪对于益生菌代谢产物中的抗菌肽进行分离纯化。筛选出能够抑制致病菌的益生菌后还要对益生菌的耐酸、耐胆盐和黏附能力进行筛选,因为只有益生菌能够耐受人体胃和肠道的复杂环境,顺利黏附到人体小肠上皮细胞上才能发挥作用。最后对于益生菌抑制致病菌黏附进行了初步研究,验证了益生菌通过代谢产物抑制黏附抑制腹泻的机制。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-8
第1章绪论  8-20
  1.1 腹泻产生的机制以及分类  8-11
    1.1.1 腹泻及其产生的机制  8-9
    1.1.2 腹泻的主要类型  9-11
  1.2 益生菌预防和治疗腹泻  11-15
    1.2.1 预防和治疗感染型腹泻  12
    1.2.2 预防和治疗艰难梭菌引起的腹泻  12-14
    1.2.3 预防和治疗轮状病毒引起的腹泻  14
    1.2.4 预防和治疗旅行者腹泻  14-15
  1.3 益生菌抑制腹泻的机制  15-18
    1.3.1 产生代谢产物抑制腹泻  15-16
    1.3.2 抑制致病菌黏附  16-17
    1.3.3 增强免疫力  17-18
    1.3.4 调节肠道渗透压  18
  1.4 本研究的目的及意义  18
  1.5 课题主要研究内容  18-20
第2章材料与方法  20-31
  2.1 试验材料  20-25
    2.1.1 供试材料  20
    2.1.2 供试菌种  20
    2.1.3 主要试剂  20-21
    2.1.4 培养基  21-24
    2.1.5 主要仪器设备  24-25
  2.2 益生菌的分离  25
  2.3 益生菌抑制引起泻功致病菌的筛选  25-28
    2.3.1 抑菌试验  25-26
    2.3.2 产抗菌肽菌株的筛选  26-27
    2.3.3 抗菌肽的纯化  27
    2.3.4 所筛出的益生菌对引起腹泻的其它致病菌的抑菌能力的测定  27-28
  2.4 益生菌耐酸、耐胆盐试验  28-29
    2.4.1 耐酸试验  28
    2.4.2 耐胆盐试验  28-29
  2.5 益生菌黏附功能的筛选  29-31
    2.5.1 益生菌菌液上清的制备  29
    2.5.2 细胞培养物制备  29
    2.5.3 益生菌黏附性试验  29-30
    2.5.4 益生菌代谢产物抑制致病菌粘附 HT-29 试验  30-31
第3章结果与分析  31-54
  3.1 益生菌分离纯化  31
  3.2 益生菌抑菌功能的筛选  31-33
    3.2.1 益生菌抑菌试验  31-32
    3.2.2 益生菌代谢产物抑菌试验  32-33
  3.3 产抗菌肽益生菌的筛选  33-36
    3.3.1 益生菌代谢产物中酸类的排除  33-34
    3.3.2 益生菌代谢产物中过氧化氢的排除  34-35
    3.3.3 益生菌代谢产物中蛋白酶检测  35
    3.3.4 益生菌代谢产物抑制沙门氏菌和志贺氏菌  35-36
  3.4 抗菌肽的分离纯化  36-37
  3.5 耐酸耐胆盐试验  37-42
    3.5.1 微酸生长试验  37-39
    3.5.2 耐酸试验  39
    3.5.3 耐胆盐试验  39-41
    3.5.4 益生菌黏附试验  41-42
  3.6 益生菌代谢产物抑制致病菌黏附  42-46
  3.7 本章小结  46-54
    3.7.1 益生菌的分离  46-47
    3.7.2 益生菌抗腹泻功能的筛选  47-48
    3.7.3 产抗菌肽菌株的筛选  48-50
    3.7.4 抗菌肽的分离纯化  50
    3.7.5 耐酸、耐胆盐试验  50-51
    3.7.6 益生菌黏附试验  51-54
结论  54-55
参考文献  55-63
致谢  63

抑制引起腹泻致病菌的益生菌筛选及机制初步研究

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