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柠檬形克勒克酵母（34-9）对柑橘意大利青霉抑菌机理的研究

作　者: 罗丽
导　师: 邓伯勋；龙超安
学　校: 华中农业大学
专　业: 园艺学
关键词: 柑橘拮抗菌34-9 意大利青霉抑菌机理
分类号: S436.66
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

随着柑橘采后病害生物防治研究的兴起,国内外已筛选出多株柑橘采后生防菌,但被实际生产应用的较少。其原因多是由于生防菌单独使用难以达到化学杀菌剂的效果。因此,迫切的需要对生防菌的拮抗机理进行研究,以针对性地对生防菌进行改良,提高其抑菌活性,指导开发应用。本实验以拮抗菌柠檬形克勒克酵母(Kloeckera apiculata)(34-9)为材料,研究了它对柑橘意大利青霉(Penicillium italicum)的防治效果,发现离体活体上它对柑橘意大利青霉(P. italicum)均具有明显的抑制作用,且抑制效果与接种拮抗菌和病原菌的时间先后有关。并从营养竞争、诱导抗性和分泌抑菌活性物质三方面初步研究了拮抗菌34-9对意大利青霉的抑菌机理,主要结果如下：(1)离体条件下用橘子汁模拟活体实验发现,单独培养病原菌24h,0.5%、5%、10%橘子汁中,孢子萌发率均能达到94%。与拮抗菌34-9共培养,孢子萌发率受到抑制,橘子汁浓度越高,抑制作用越弱。0.5%、5%和10%橘子汁中,抑制率分别为80.9%、40.3%和4.3%。拮抗菌34-9在各浓度橘子汁中均大量繁殖,24 h后分别增加到1.70倍、6.25倍和32.5倍。将与拮抗菌34-9共培养的病原菌孢子转移至新鲜橘子汁中后,0.5%和5%橘子汁中孢子萌发率显著增加,10%橘子汁中孢子萌芽率无明显变化。活体上,向果实伤口添加外源维生素和氨基酸后,拮抗菌34-9对病原菌的抑制作用减弱,添加氨基酸的处理表现尤为明显。(2)拮抗菌34-9在一定程度上能诱导果实产生抗性,与处理时间长短和处理位点远近有关。拮抗菌34-9处理24 h,柑橘果实系统抗性无显著变化,48 h后抗性显著增强；距离拮抗菌34-9处理位点越近的部位系统抗性越强。拮抗菌34-9细胞能在48 h内刺激柑橘果实PPO、β-1,3-葡聚糖酶和PAL活性升高。其产生的抑菌活性物质能诱导果实SOD、POD、CAT、β-1,3-葡聚糖酶活性升高。抑菌活性物质处理24 h后POD和β-1,3-葡聚糖酶活性达到最大值,分别为对照的1.8倍和1.2倍；处理48 h后SOD活性达最大值,为对照的1.4倍；48 h后,CAT活性维持在较对照高的水平。(3)粗提活性物质在离体、活体条件下对意大利青霉都有很好的抑制作用。离体条件下,对病原菌的最小抑菌浓度为3.75μL/mL,最小杀菌浓度为10μL/mL。病原菌孢子用15μL/mL粗提活性物质处理后其质膜会发生破损,处理时间越长,破损得越多。处理2 h,约5%发生破损；4h后,增加到20%；6h后,又增加5%；8h时30%孢子破损。用5μL/mL和10μL/mL粗提活性物质处理柑橘果实,7d后其腐烂率比对照分别下降50%和89%。

全文目录

摘要  7-9
Abstract  9-11
1 引言  11-20
  1.1 柑橘产业状况  11
  1.2 柑橘采后主要病害  11-12
    1.2.1 柑橘采后损失及主要病害  11-12
    1.2.2 柑橘青霉病发病症状  12
    1.2.3 柑橘青霉病发病规律  12
  1.3 柑橘青霉病防治研究现状  12-14
    1.3.1 物理防治  12-13
    1.3.2 化学防治  13
    1.3.3 生物防治  13-14
  1.4 拮抗酵母菌作用机理的研究  14-18
    1.4.1 营养或空间竞争  15-16
    1.4.2 对病原菌的直接寄生作用  16
    1.4.3 诱导寄主产生抗性  16-17
    1.4.4 产生抗生性代谢物质  17-18
  1.5 课题来源及意义  18-20
2 材料与方法  20-28
  2.1 拮抗菌  20
  2.2 病原菌  20
  2.3 供试果实  20
  2.4 培养基  20
  2.5 拮抗菌34-9对柑橘意大利青霉作用  20-21
    2.5.1 离体条件下抑菌试验  20-21
    2.5.2 活体条件下抑菌试验  21
  2.6 营养竞争  21-23
    2.6.1 拮抗菌34-9和病原菌在离体条件下的营养竞争作用  21-22
    2.6.2 病原菌孢子活力检测  22
    2.6.3 拮抗菌34-9和病原菌在活体上的营养竞争作用  22-23
      2.6.3.1 不同外源营养物质对拮抗作用的影响  22-23
      2.6.3.2 不同浓度氨基酸溶液对拮抗作用的影响  23
  2.7 诱导抗性  23-26
    2.7.1 拮抗菌34-9对柑橘果实系统诱导抗性的评价试验  23
      2.7.1.1 处理不同时间对柑橘果实系统诱导抗性的评价  23
      2.7.1.2 不同距离处理对柑橘果实系统诱导抗性的评价  23
    2.7.2 拮抗菌34-9对柑橘果实抗性相关酶活性的影响  23-26
      2.7.2.1 拮抗菌34-9对柑橘果实SOD活性的影响  24
      2.7.2.2 拮抗菌34-9对柑橘果实POD活性的影响  24
      2.7.2.3 拮抗菌34-9对柑橘果实CAT活性的影响  24
      2.7.2.4 拮抗菌34-9对柑橘果实PPO活性的影响  24-25
      2.7.2.5 拮抗菌34-9对柑橘果实β-1,3-葡聚糖酶活性的影响  25
      2.7.2.6 拮抗菌34-9对柑橘果实PAL活性的影响  25-26
  2.8 粗提抑菌活性物质的研究  26-27
    2.8.1 不同浓度粗提抑菌活性物质对病原孢子萌发的影响  26
    2.8.2 粗提抑菌活性物质对病原菌最小抑菌浓度和最小杀菌浓度的测定  26
    2.8.3 粗提抑菌活性物质对病原孢子质膜完整性(MI)的影响  26-27
    2.8.4 粗提抑菌活性物质在活体上的活性检测试验  27
    2.8.5 粗提抑菌活性物质对柑橘果实抗性相关酶活性的影响  27
  2.9 数据分析  27-28
3 结果与分析  28-43
  3.1 拮抗菌34-9对柑橘意大利青霉菌的抑制作用  28-29
    3.1.1 离体条件下抑菌作用  28
    3.1.2 活体条件下抑菌作用  28-29
  3.2 营养竞争  29-31
    3.2.1 拮抗菌34-9和病原菌在离体条件下的营养竞争作用  29-30
    3.2.2 拮抗菌34-9和病原菌在活体上的营养竞争作用  30-31
  3.3 诱导抗性  31-36
    3.3.1 拮抗菌34-9对柑橘果实的系统诱导抗性  31-32
    3.3.2 拮抗菌34-9处理对柑橘果实抗性相关酶活性的影响  32-36
      3.3.2.1 拮抗菌34-9对柑橘果实SOD活性的影响  32
      3.3.2.2 拮抗菌34-9对柑橘果实POD活性的影响  32-33
      3.3.2.3 拮抗菌34-9对柑橘果实CAT活性的影响  33-34
      3.3.2.4 拮抗菌34-9对柑橘果实PPO活性的影响  34
      3.3.2.5 拮抗菌34-9对柑橘果实β-1,3-葡聚糖酶活性的影响  34-35
      3.3.2.6 拮抗菌34-9对柑橘果实PAL活性的影响  35-36
  3.4 粗提活性物质的研究  36-43
    3.4.1 不同浓度粗提活性物质对病原孢子萌发的影响  36
    3.4.2 粗提活性物质对病原菌的MIC和MFC  36-38
    3.4.3 粗提活性物质对病原孢子质膜完整性(MI)的影响  38-39
    3.4.4 粗提活性物质在活体上的抑菌活性检测试验  39
    3.4.5 粗提活性物质对柑橘果实抗性相关酶活性的影响  39-43
      3.4.5.1 粗提活性物质对柑橘果实SOD活性的影响  39-40
      3.4.5.2 粗提活性物质对柑橘果实POD活性的影响  40
      3.4.5.3 粗提活性物质对柑橘果实CAT活性的影响  40-41
      3.4.5.4 粗提活性物质对柑橘果实PPO活性的影响  41
      3.4.5.5 粗提活性物质对柑橘果实β-1,3-葡聚糖酶活性的影响  41-42
      3.4.5.6 粗提活性物质对柑橘果实PAL活性的影响  42-43
4 讨论  43-47
  4.1 拮抗菌34-9对柑橘意大利青霉菌的抑制作用  43
  4.2 拮抗菌34-9对柑橘意大利青霉菌的抑菌机理  43-47
下一步研究计划  47-48
参考文献  48-57
附录  57-58
致谢  58-59
附图及说明  59-60

柠檬形克勒克酵母（34-9）对柑橘意大利青霉抑菌机理的研究

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