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染色体结构维持蛋白SMC1A在胶质瘤中的调节作用研究

作　者: 林敏
导　师: 熊志奇
学　校: 华东理工大学
专　业: 化学生物技术与工程
关键词: SMC1A 胶质瘤 shRNA
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

凝集蛋白是由SMC1A, SMC3和Rad21组成的异三重复合体,它在分裂间期之后与染色体质相关,主要是在染色体复制后期将姐妹染色单体固定在一起。有报道,凝集蛋白复合体的亚基SMC1A在人结肠癌中突变,导致基因组不稳定而造成癌症。然而,在胶质瘤中并没有关于SMC1A的相关报道。我们的研究结果显示：在大鼠胶质瘤细胞系C6中SMC1A表达量明显高于大鼠胶质细胞；相对于其他脑组织样本,SMC1A基因在胶质瘤样本中表达偏高。在后续的研究中我们采用了包装有SMC1A shRNA的慢病毒载体干扰工具。对U251胶质瘤细胞进行感染,我们发现相对于未感染慢病毒细胞和感染了对照慢病毒的U251细胞,感染了SMC1A干扰慢病毒的U351细胞生长明显受到抑制,并且细胞周期抑制在G2/M期。分子机制实验结果表明,感染了SMC1A干扰慢病毒的U251细胞细胞周期蛋白CyclinB1与增值核抗原蛋白PCNA表达降低了,而细胞中能降解Cylin B1的基因CCNB1IP1 mRNA水平升高了。这些结果启示我们：敲减SMC1A抑制胶质瘤细胞的生长,SMC1A或许能够作为治疗胶质瘤的一个潜在靶点,参与和辅助胶质瘤的治疗。在TC10β/CDC42 GTPase activating protein is required for the growth of cortical neuron dendrites. Neuroscience.2011 Sep 28文章中帮助师兄对TCGAP基因的干扰质粒进行了外源性和内源性的干扰效率验证,证明了构建的TCGAP质粒具有很好的干扰效果。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-9
第1章绪论  9-25
  1.1 引言  9
  1.2 胶质瘤  9-11
    1.2.1 胶质瘤病程与症状  9-10
    1.2.2 胶质瘤等级及其特点  10
    1.2.3 胶质瘤主要的基因变化  10-11
  1.3 染色体结构维持蛋白SMC1A  11-17
    1.3.1 SMC1A的结构特点  11-13
    1.3.2 SMC1A的分子作用  13-16
    1.3.3 SMC1A与疾病  16-17
  1.4 RNA干扰  17-23
    1.4.1 慢病毒RNA干扰  17-19
    1.4.2 胶质瘤中miRNA干扰  19-23
  1.5 细胞增殖与周期  23-25
第2章实验材料与方法  25-36
  2.1 实验材料  25-29
    2.1.1 生物试剂  25-26
    2.1.2 化学试剂  26-27
    2.1.3 其他试剂及其配制  27-29
  2.2 仪器与设备  29-30
  2.3 实验方法  30-36
    2.3.1 细胞培养  30-31
    2.3.2 RNA提取  31
    2.3.3 RNA反转录  31
    2.3.4 实时定量PCR  31-32
    2.3.5 蛋白质印迹  32-33
    2.3.6 MTT检测  33-34
    2.3.7 单克隆形成  34
    2.3.8 流式细胞术检测  34-36
第3章染色体结构维持蛋白SMC1A在胶质瘤中的调节作用研究  36-44
  3.1 SMC1A在胶质瘤中的表达  36
  3.2 SMC1A慢病毒载体感染  36-37
  3.3 SMC1A慢病毒感染与敲减效率验证  37-38
  3.4 慢病毒敲减SMC1A抑制细胞生长  38-39
  3.5 敲减SMC1A导致U251细胞阻滞在G2/M期  39-41
  3.6 敲减SMC1A其他基因的表达变化  41-42
  3.7 TCGAP的RNA干扰治疗的干扰效率验证  42-44
第4章结论  44-46
参考文献  46-53
研究生期间科研成果  53-54
致谢  54-55
附录  55

染色体结构维持蛋白SMC1A在胶质瘤中的调节作用研究

内容摘要

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