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HSV-1感染对神经胶质瘤细胞神经营养因子及相关受体表达影响的研究

作　者: 侯云
导　师: 王斌
学　校: 青岛大学
专　业: 病原生物学
关键词: 单纯疱疹病毒1型 神经胶质瘤细胞 神经营养因子 神经营养因子受体
分类号: R739.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的：1.研究单纯疱疹病毒1型(Herpes simplex virus typel, HSV-1)感染对神经胶质瘤细胞凋亡的影响。2.研究HSV-1感染对神经胶质瘤细胞神经营养因子(NGF、BDNF)及受体trkA、P75NTR表达变化情况的影响,探讨HSV-1感染诱导神经细胞凋亡的机制。方法：1.用HSV-1感染人神经胶质瘤细胞(U251),感染U251细胞6h后,RT-PCR、Western blot检测HSV-1糖蛋白D(gD)的表达情况；倒置显微镜下观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测HSV-1感染对U251细胞凋亡的影响。2.体外培养U251细胞,HSV-1感染细胞后6h、12h、18h和24h收获细胞为实验组,以未感染细胞为对照组。RT-PCR检测U251细胞NGF、BDNF及受体trkA、P75NTR mRNA的转录水平,Western blot检测U251细胞NGF、BDNF及受体trkA、P75NTR蛋白的表达水平。结果：1.HSV-1感染U251细胞12h后,细胞形态学可见细胞间隙增宽,细胞肿胀变圆；18h后病变更加明显,绝大部分细胞变成圆形、椭圆形,胞体及胞核增大,细胞脱落,胞质混浊,细胞透光性降低；24h可见所有感染细胞均出现细胞病变效应(CPE)。2. RT-PCR、Western blot检测HSV-1gD的表达用于证实HSV-1可感染U251细胞,成功建立了U251细胞的HSV-1感染模型。流式细胞仪检测HSV-1感染U251细胞后,在第12h开始出现少量细胞凋亡,随感染时间延长,凋亡细胞增多,至第30h近半数细胞凋亡。在感染后24h、30h时,凋亡率分别为23.1%、25.1%与正常细胞凋亡率11%比较,差别具有统计学意义(P<0.05)。3.HSV-1感染U251细胞后,RT-PCR结果显示NGF和BDNF mRNA在各个时间点均有表达,其中第6h表达量最高,随时间延长表达逐渐下降；P75NTRmRNA在各个时间点也均表达,其在第12h达到最高,以后逐渐降低；而trkA mRNA在感染的开始阶段低表达,随时间延长逐渐降低,至24h表达消失。Western blot结果显示在不同时间段均有NGF、BDNF和P75NTR蛋白的表达,但未见trkA蛋白的表达,NGF蛋白在HSV-1感染后12h表达量最高,随时间延长表达逐渐下降；BDNF和P75NTR蛋白18h达到最高,以后逐渐降低。结论：1.HSV-1可在U251细胞内建立感染。2.HSV-1感染可诱导U251细胞发生凋亡。3.HSV-1感染致U251细胞凋亡过程中,神经营养因子及受体表达异常。其中NGF及其低亲和力受体P75NTR出现表达强度随时间先增强后减弱的趋势,而高亲和力受体trkA持续低表达,BDNF表达强度与NGF呈现一致的随时间先增强后减弱的趋势。推测神经营养因子及受体的异常表达可能参与了HSV-1感染致细胞凋亡的机制。

全文目录


摘要  2-4
Abstract  4-7
引言  7-9
第一章 材料  9-13
  1.1 病毒  9
  1.2 细胞及培养  9
  1.3 主要实验仪器设备  9-10
  1.4 主要实验试剂及配制  10-13
第二章 方法  13-23
  2.1 HSV-1 SM44株毒种的制备和定量  13-14
  2.2 HSV-1神经胶质瘤细胞感染模型的建立  14-20
  2.3 HSV-1感染对神经胶质瘤细胞凋亡的影响  20
  2.4 RT-PCR检测HSV-1感染细胞内神经营养因子及受体基因的相对表达水平  20-22
  2.5 Western blot检测HSV-1感染细胞内神经营养因子及受体蛋白的表达水平  22-23
第三章 结果  23-35
  3.1 HSV-1 SM44株毒种的扩增和定量  23-24
  3.2 HSV-1感染致神经胶质瘤细胞病变的建立  24-27
  3.3 HSV-1感染诱导神经胶质瘤细胞的凋亡  27-29
  3.4 HSV-1感染U251细胞后神经营养因子及受体基因的表达  29-32
  3.5 HSV-1感染U251细胞后神经营养因子及受体蛋白的表达  32-35
第四章 讨论  35-39
  4.1 HSV-1与神经胶质细胞  35-36
  4.2 神经营养因子及相关受体  36-37
  4.3 HSV-1感染神经胶质瘤细胞神经营养因子及受体表达异常  37-39
第五章 结论  39-40
参考文献  40-42
综述  42-54
  参考文献  49-54
攻读学位期间的研究成果  54-55
致谢  55-56

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 神经系肿瘤
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