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鼻咽癌紫杉醇耐药细胞以及其亲本细胞的细胞周期分布

作　者: 郗永峰
导　师: 谭国林
学　校: 中南大学
专　业: 耳鼻咽喉头颈外科
关键词: 鼻咽肿瘤 紫杉醇 顺铂 耐药细胞系 亲本细胞系 G2/M期阻滞 细胞周期蛋白依赖性激酶CDK1
分类号: R739.63
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


肿瘤化疗药物抵抗的分子机制十分复杂,目前归纳为基因突变-药物抵抗假说和染色体不平衡-药物抵抗假说。目前,鼻咽癌化疗药物抵抗过程中,其细胞周期改变及细胞周期调控因子机制尚不清楚,深入研究十分重要,对指导鼻咽癌的治疗有重要价值。目的：探讨鼻咽癌亲本细胞系及耐药细胞系细胞周期改变及细胞周期调控因子变化情况,了解细胞周期改变及细胞周期调控因子与鼻咽癌化疗耐药发生发展中的关系；试图发现细胞周期改变及细胞周期调控因子在鼻咽癌化疗耐药过程中的作用。方法：1.以鼻咽癌细胞CNE-1, HNE2,5-8F及被诱导产生的紫杉醇耐药细胞CNE-1/Taxol, HNE-2/Taxol,5-8F/Taxol为研究对象,用集落形成实验检测所有细胞系的生长抑制率,并计算其紫杉醇和顺铂半数抑制剂量(IC50)。2.流式细胞仪检测不同浓度的紫杉醇(0 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml、15ng/ml、20ng/ml、25ng/ml)和顺铂(0ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、300 ng/ml、400 ng/ml、500 ng/ml)处理鼻咽癌亲本细胞系及紫杉醇耐药细胞系后细胞周期分布情况。3.荧光定量PCR检测鼻咽癌亲本细胞系和紫杉醇耐药系细胞周期蛋白依赖性激酶CDK1和有丝分裂纺锤体检控点基因BubR1的表达。结果：1.CNE-1/Taxol、HNE-2/Taxol、5-8F/Taxol紫杉醇的IC50值分别为9.61±0.43、11.48±0.52、9.9±0.48 ng/ml,相应亲本细胞的IC50值分别为1.14±0.05、1.78±0.08、1.63±0.06ng／ml,其耐药指数分别为8.43±0.42、6.45±0.31、6.11±0.35；顺铂作用于鼻咽癌亲本细胞CNE-1、HNE-2、5-8F的IC50值分别为：380.83±16.42ng/ml、362.12±15.31ng/ml、316.82±14.65ng/ml,作用于耐药细胞CNE-1/Taxol、HNE-2/Taxol、5-8F/Taxol的IC50值分别为177.43±7.65ng/ml、69.94±3.53ng/ml、147.91±6.53ng/ml。2.10ng/ml紫杉醇处理鼻咽癌亲本细胞系(CNE-1, HNE-2)出现G2／M期阻滞,并随浓度增加G2／M期阻滞逐渐增加；15ng／ml紫杉醇处理鼻咽癌耐药细胞系(CNE-1/Taxol, HNE-2/Taxol)才引起G2/M期阻滞,并随浓度增加G2／M期逐渐增加；相同浓度紫杉醇引起鼻咽癌亲本细胞G2/M阻滞明显高于鼻咽癌紫杉醇耐药细胞系(p<0.05)；顺铂可以导致鼻咽癌亲本细胞系及耐药细胞系细胞周期S期明显增加,相同浓度顺铂处理时,鼻咽癌紫杉醇耐药细胞系S期分布明显高于亲本细胞系(p<0.05)。3.鼻咽癌紫杉醇耐药细胞(HNE-2/Taxol)中细胞周期蛋白依赖性激酶CDK1表达比在亲本细胞(HNE-2)中上调约3倍。结论：1.鼻咽癌细胞诱导成耐药细胞后,其细胞周期时相分布没有显著变化,但引起其发生G2/M期和S期阻滞的紫杉醇和顺铂的最低浓度发生了显著变化。2.鼻咽癌耐药细胞G2/M期和S期阻滞的药物浓度变化可能与细胞周期G2/M期检控点关键分子、细胞周期蛋白依赖性激酶CDK1表达上调有关,而与纺锤体检控点蛋白BubR1无关。

全文目录


摘要  4-6
ABSTRACT  6-9
前言  9-11
第一章 材料与方法  11-18
  1.1 实验材料  11-13
    1.1.1 细胞株  11
    1.1.2 主要试剂与耗材  11-12
    1.1.3 仪器设备  12
    1.1.4 试验中所用部分培养基及试剂的配制  12-13
  1.2 实验方法  13-17
    1.2.1 细胞培养  13
    1.2.2 集落形成实验(Colony formation assay)  13-14
    1.2.3 细胞周期的流式细胞检测  14-15
    1.2.4 逆转录多聚酶链式反应(荧光定量PCR)检测BubR1、CDK1在鼻咽癌细胞株(HNE-2)及耐药细胞株(HNE-2/Taxol)中的表达  15-17
  1.3 统计学方法  17-18
第二章 实验结果  18-28
  2.1 鼻咽癌耐药细胞系抵抗紫杉醇的耐药指数  18
  2.2 顺铂对鼻咽癌耐药细胞的生长抑制率  18-19
  2.3 紫杉醇对鼻咽癌耐药细胞及亲本细胞细胞周期分布的影响  19-22
    2.3.1 紫杉醇对CNE-1和CNE-1/Taxol细胞周期的影响  19-20
    2.3.2 紫杉醇对HNE-2和HNE-2/Taxol细胞周期的影响  20-22
  2.4 顺铂对鼻咽癌耐药细胞及亲本细胞细胞周期的影响  22-24
    2.4.1 顺铂对CNE-1和CNE-1/Taxol细胞周期的影响  22-23
    2.4.2 顺铂对HNE-2和HNE-2/Taxol细胞周期的影响  23-24
  2.5 定量PCR检测细胞周期蛋白激酶CDK1及有丝分裂纺锤体检控点基因BubR1在鼻咽癌亲本细胞及紫杉醇耐药细胞中的表达  24-28
第三章 讨论  28-31
第四章 结论  31-32
参考文献  32-34
综述  34-44
致谢  44-45
攻读学位期间的研究成果  45

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 耳鼻咽喉肿瘤 > 咽肿瘤
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