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活络效灵丹及其系列组方对缺氧/复氧损伤心肌细胞的保护作用

作　者: 赵妍
导　师: 王春丽
学　校: 华东理工大学
专　业: 中药学
关键词: 活络效灵丹缺氧/复氧损伤心肌细胞凋亡抗氧化凋亡基因
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

活络效灵丹是活血化瘀的经典方剂,出自清代名医张锡纯的《医学衷中参西录》,具有活血祛瘀、通络止痛的作用,是活血止痛的常用方剂。近年来,活络效灵丹在临床上也开始应用于治疗各类冠心病,但对其治疗心肌缺血再灌注的研究尚少。本研究运用血清药理学方法,在原代大鼠乳鼠心肌细胞上建立缺氧/复氧(Hypoxia/Reoxygenation, H/R)模型,模拟在体心肌缺血/再灌注(Ischemia/Reperfusion,I/R)损伤,并采用冠心病常用药单硝酸异山梨酯(Isosorbide Mononitrate)作为阳性对照药物,观察活络效灵丹及其系列组方对缺氧/复氧损伤心肌细胞的保护作用。主要研究结果如下：1.活络效灵丹对缺氧/复氧损伤心肌细胞的保护作用的评价。采用MTT法,比色法和流式细胞术,考察其对H/R损伤心肌细胞的存活率、LDH漏出量、MDA含量、SOD活性以及心肌细胞凋亡率的影响。结果提示,活络效灵丹对缺氧/复氧损伤心肌细胞具有良好的保护作用。2.活络效灵丹系列组方对缺氧/复氧损伤心肌细胞保护作用的初步筛选。采用MTT法和比色法,考察其对H/R损伤心肌细胞的存活率、LDH漏出量的影响。结果提示,活络效灵丹组、丹参当归组、丹参乳香组、丹参当归乳香组在保护缺氧/复氧损伤心肌细胞方面疗效更为显著,用来进行进一步研究。3.活络效灵丹系列优化组方对H/R损伤心肌细胞保护作用相关机制的评价。采用比色法和PCR法,考察其对H/R损伤心肌细胞的MDA含量、SOD活性以及心肌细胞凋亡基因Bcl-2和Bax mRNA的影响。结果提示,活络效灵丹优化组方在保护H/R损伤心肌细胞的作用机制可能与其对抗自由基损伤、上调Bcl-2基因表达和下调Bax基因表达有关。4.活络效灵丹方中的丹参和当归在保护心肌细胞抗氧化损伤及调控细胞凋亡基因表达方面起主导作用。综上研究表明,活络效灵丹及其系列组方对H/R损伤心肌细胞具有良好的保护作用,在冠心病尤其是心肌缺血再灌注疾病的治疗中具有潜在的应用价值。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-12
第1章概论  12-22
  1.1 现代医学对心肌缺血的认识  12-15
    1.1.1 现代医学对心肌缺血的认识  12-13
    1.1.2 心肌缺血/再灌注损伤机制的研究进展  13-15
  1.2 中医学对心肌缺血的认识与治疗概况  15-18
    1.2.1 中医学对心肌缺血的认识  15
    1.2.2 中医学对心肌缺血的病因病机与治法  15-17
    1.2.3 中药对心肌缺血的药理学机制研究现状  17-18
  1.3 活络效灵丹的研究现状  18-20
    1.3.1 当归  19
    1.3.2 丹参  19
    1.3.3 乳香  19-20
    1.3.4 没药  20
  1.4 课题的研究内容与创新点  20-22
    1.4.1 主要研究内容  20-21
    1.4.2 课题的创新点  21-22
第2章活络效灵丹含药血清对乳鼠缺氧/复氧损伤心肌细胞的保护作用研究  22-40
  2.1 实验材料  22-25
    2.1.1 实验药物  22
    2.1.2 实验试剂  22-23
    2.1.3 主要溶液的配制  23-24
    2.1.4 实验仪器  24
    2.1.5 实验动物  24-25
  2.2 实验方法  25-30
    2.2.1 活络效灵丹含药血清的制备  25
    2.2.2 乳鼠心肌细胞原代培养  25-26
    2.2.3 心肌细胞形态学观察  26
    2.2.4 活络效灵丹含药血清对正常培养心肌细胞的影响  26
    2.2.5 实验分组  26
    2.2.6 缺氧/复氧损伤模型的建立  26
    2.2.7 心肌细胞存活率的测定  26-27
    2.2.8 心肌细胞LDH漏出量测定  27
    2.2.9 心肌细胞MDA活性测定  27-28
    2.2.10 心肌细胞SOD活性测定  28-29
    2.2.11 心肌细胞凋亡率的测定  29-30
    2.2.12 统计学分析  30
  2.3 结果  30-37
    2.3.1 心肌细胞形态观察  30
    2.3.2 活络效灵丹含药血清对正常培养心肌细胞的影响  30-32
    2.3.3 活络效灵丹含药血清对心肌细胞存活率的影响  32-33
    2.3.4 活络效灵丹含药血清对心肌细胞LDH、MDA以及SOD的影响  33-35
    2.3.5 活络效灵丹含药血清对心肌细胞凋亡率的影响  35-37
  2.4 讨论  37-38
    2.4.1 心肌细胞缺氧/复氧模型的建立  37
    2.4.2 缺氧/复氧心肌细胞各损伤指标的选择和分析  37-38
  2.5 本章小结  38-40
第3章活络效灵丹系列组方对保护乳鼠缺氧/复氧损伤心肌细胞作用的初步筛选  40-49
  3.1 实验材料  40-42
    3.1.1 实验药物  40
    3.1.2 实验试剂  40
    3.1.3 主要溶液的配制  40-41
    3.1.4 实验仪器  41-42
    3.1.5 实验动物  42
  3.2 实验方法  42-44
    3.2.1 活络效灵丹含药血清的制备  42-43
    3.2.2 乳鼠心肌细胞原代培养  43
    3.2.3 实验分组  43
    3.2.4 缺氧/复氧损伤模型的建立  43
    3.2.5 心肌细胞存活率的测定  43
    3.2.6 心肌细胞LDH漏出量测定  43
    3.2.7 统计学分析  43-44
  3.3 结果  44-47
    3.3.1 活络效灵丹系列组方对心肌细胞存活率的影响  44-45
    3.3.2 活络效灵丹系列组方对心肌细胞LDH漏出量的影响  45-47
  3.4 讨论  47
  3.5 本章小结  47-49
第4章活络效灵丹优化组方对乳鼠缺氧/复氧损伤心肌细胞的保护作用机制研究  49-61
  4.1 实验材料  49-52
    4.1.1 实验药物  49
    4.1.2 实验试剂  49-50
    4.1.3 主要溶液的配制  50-51
    4.1.4 实验仪器  51-52
    4.1.5 实验动物  52
  4.2 实验方法  52-55
    4.2.1 活络效灵丹含药血清的制备  52-53
    4.2.2 乳鼠心肌细胞原代培养  53
    4.2.3 实验分组  53
    4.2.4 缺氧/复氧损伤模型的建立  53
    4.2.5 心肌细胞MDA活性测定  53
    4.2.6 心肌细胞SOD活性测定  53
    4.2.7 PCR法检测Bcl-2、Bax mRNA的表达  53-55
    4.2.8 统计学分析  55
  4.3 结果  55-59
    4.3.1 活络效灵丹优化组方对心肌细胞MDA、SOD的影响  55-57
    4.3.2 活络效灵丹优化组方对乳鼠心肌细胞Bcl-2、Bax mRNA表达的影响  57-59
  4.4 讨论  59-60
  4.5 本章小结  60-61
第5章结论与展望  61-62
  5.1 结论  61
  5.2 展望  61-62
参考文献  62-67
致谢  67-68
硕士期间发表的论文  68

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