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瑞香狼毒内生真菌对原植物成分降解作用的研究

作　者: 杨国栋
导　师: 宋晓平
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 临床兽医学
关键词: 瑞香狼毒内生真菌分类鉴定降解
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 65次
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内容摘要

瑞香狼毒(Stellera Chamaejasme L)是一种在我国广泛分布的有毒植物。瑞香狼毒不仅可引起家畜中毒,而且还与牧草争肥、水和光照,从而抑制优良牧草生长,导致草地生态呈恶性循环,加速天然草原退化。目前草原瑞香狼毒的防除仍存在一定困难。内生真菌是指整个生活史或者生活史中的某一个阶段存在于植物组织内部,且不会引起宿主出现明显病症或者没有对宿主造成明显伤害的一类真菌。现有研究表明,有的内生真菌自身可分泌多种入侵、定植到宿主植物内部和降解宿主植物成分所需的多种酶类,且有的内生真菌还亲自参与宿主植物成分的降解。为了给综合防治瑞香狼毒提供新的思路和基础资料,本试验从瑞香狼毒茎叶中分离瑞香狼毒内生真菌,并进行了瑞香狼毒内生真菌降解宿主成分的研究,取得了以下结果:1.瑞香狼毒化学成分预试验及糖类成分检测:采用系统预试验方法对瑞香狼毒茎叶和根的化学成分进行检测,结果表明,瑞香狼毒根部主要含有黄酮类、甾体、萜类、有机酸、挥发油、内酯香豆素、糖及其苷类化合物;可能含有皂苷、强心苷;不含蒽醌、生物碱。瑞香狼毒茎叶主要含有黄酮类、甾体、萜类、有机酸、挥发油、蒽醌、内酯香豆素、糖及其苷类;可能含有皂苷、强心苷、蛋白质;不含生物碱。采用薄层色谱法,以V(氯仿):V(冰醋酸):V(水)=18:21:3为展开剂,苯胺-二苯胺磷酸丙酮溶液为显色剂,对瑞香狼毒茎叶中的可溶性糖进行定性检测。采用苯酚-硫酸比色法,以葡萄糖标准液制作标准曲线,对瑞香狼毒茎叶中可溶性糖和总糖含量进行测定,结果表明瑞香狼毒茎叶中的可溶性糖主要为葡萄糖和蔗糖,茎叶中可溶性糖和总糖含量分别为34.2 g/kg和77.8 g/kg。2瑞香狼毒内生真菌的分离与鉴定:采用组织块培养法对瑞香狼毒茎、叶、花、根中的内生真菌进行分离培养,共分离到内生真菌178株,其中叶部91株,茎部59株,根部17株,花11株。根据菌株的菌落形态、大小、颜色、生长速率、质地、培养基颜色变化以及菌丝体和孢子的形态特征对其中分离的68株内生真菌进行鉴定。结果表明,藻菌纲毛霉目毛霉科根霉属黑根霉(Rhizopus nigricans Ehrenb)1株。半知菌纲丛梗孢目丛梗孢科的青霉属(Penicillium link)6株,曲霉属(Aspergillus link)4株,头孢霉属(Cephalosporium Corda)1株,丛梗孢属(Monilia Pers.)2株;半知菌纲丛梗孢目暗梗孢科的交链孢属(Alternaria Nees ex Wallr.)36株,绕顶霉属(Acrospeira B. et Br.)1株;半知菌纲丛梗孢目瘤座孢科的镰孢属(Fusarium Lk..ex Fr.)2株,枝孢霉属(Ramulispora Miura)1株;半知菌纲无孢目无孢菌群的丝核菌属(Rhizoctonia DC. Ex Fr.)1株;另有未产孢内生真菌13株。3.降解瑞香狼毒化学成分的内生真菌的筛选:以瑞香狼毒茎叶乙醇提取物为碳源制作筛选培养基,以能否在筛选培养基上生长为判定标准,对分离到的内生真菌进行初步筛选,共筛选到能在筛选培养基上生长的内生真菌17株。用D101大孔吸附树脂对瑞香狼毒茎叶醇提取物进行了处理,除去了其中的可溶性糖类成分,制备得到醇洗部分(瑞香狼毒精提物,JSW)。以JSW为唯一碳源制作复选培养基,对初选的内生真菌进行进一步筛选,共筛选出5株对瑞香狼毒化学成分有降解作用的内生真菌。经鉴定分别为交链孢属2株,无孢目1株,曲霉属1株,枝孢霉属1株。4.内生真菌降解瑞香狼毒成分降解率的测定:通过对试验组和对照组瑞香狼毒内生真菌曲霉属C1-Y7-4株培养液中黄酮类和香豆素类化合物含量的测定,发现试验组液体培养基中的黄酮类和香豆素类化合物含量均比对照组的低,且试验组和对照组间差异极显著。表明瑞香狼毒内生真菌曲霉属C1-Y7-4在生长过程中对黄酮类化合物和香豆素类化合物均有降解作用,在试验条件下其降解率分别为27.54%和26.70%。本试验首次发现瑞香狼毒内生真菌对原植物成分具有降解作用。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-12
引言  12-13
文献综述  13-31
  第一章瑞香狼毒和植物内生真菌的研究进展  13-31
    1.1 瑞香狼毒的研究进展  13-27
      1.1.1 瑞香狼毒的形态学特征和生物学特性  13-14
      1.1.2 瑞香狼毒的分布、危害及防治  14-15
      1.1.3 瑞香狼毒的化学成分研究  15-22
      1.1.4 瑞香狼毒的毒性成分研究  22-23
      1.1.5 瑞香狼毒的药理活性研究  23-27
    1.2 内生真菌的研究进展  27-31
      1.2.1 内生真菌研究历史  27
      1.2.2 内生真菌多样性的研究  27
      1.2.3 内生真菌和宿主关系的研究  27-31
试验研究  31-68
  第二章瑞香狼毒化学成分预试验及糖类成分检测  31-39
    2.1 材料与方法  31-34
      2.1.1 材料  31-32
      2.1.2 方法  32-34
    2.2 结果  34-36
      2.2.1 化学成分预试验结果  34-35
      2.2.2 瑞香狼毒茎叶中可溶性糖定性检测结果  35
      2.2.3 瑞香狼毒茎叶中糖含量的测定结果  35-36
    2.3 讨论  36-38
      2.3.1 预试验样品液的制备和结果判定  36
      2.3.2 瑞香狼毒根与茎叶的主要化学成分类型  36-37
      2.3.3 瑞香狼毒茎叶糖类成分的测定  37
      2.3.4 瑞香狼毒茎叶中糖的种类及含量  37-38
    2.4 小结  38-39
  第三章瑞香狼毒内生真菌的分离与鉴定  39-50
    3.1 材料与方法  39-40
      3.1.1 试验材料  39
      3.1.2 试验方法  39-40
    3.2 结果  40-48
      3.2.1 瑞香狼毒内生真菌的分离与鉴定  40-48
    3.3 讨论  48-49
    3.4 小结  49-50
  第四章降解瑞香狼毒化学成分的内生真菌的筛选  50-61
    4.1 材料与方法  50-52
      4.1.1 试验材料  50
      4.1.2 试验方法  50-52
    4.2 结果  52-59
      4.2.1 瑞香狼毒化学成分的提取和分离  52-53
      4.2.2 菌株初选结果  53-58
      4.2.4 菌株复选结果  58-59
    4.3 讨论  59-60
      4.3.1 筛选培养基添加物浓度的确定  59-60
      4.3.2 降解瑞香狼毒化学成分内生真菌的筛选  60
    4.4 小结  60-61
  第五章瑞香狼毒内生真菌对宿主成分降解率的测定  61-68
    5.1 材料与方法  61-63
      5.1.1 试验材料  61
      5.1.2 试验方法  61-63
    5.2 结果  63-65
      5.2.1 孢子液中孢子的浓度  63
      5.2.2 标准曲线的制作  63-64
      5.2.3 目标菌对黄酮类和香豆素类化合物降解率的测定  64-65
      5.2.4 黄酮类和香豆素类成分含量测定方法可靠性考察  65
    5.3 讨论  65-67
      5.3.1 瑞香狼毒内生真菌对黄酮类化合物和香豆素类化合物的降解作用  65-66
      5.3.2 瑞香狼毒内生真菌降解宿主成分可能存在的机理  66
      5.3.3 瑞香狼毒内生真菌对宿主植物毒性成分降解的意义  66-67
    5.4 小结  67-68
结论  68-69
进一步研究的课题  69-70
参考文献  70-79
致谢  79-80
作者简介  80

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