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胶质瘤中NGF、TrkA的表达及作用机制

作　者: 杜宝顺
导　师: 张新中
学　校: 新乡医学院
专　业: 神经外科
关键词: 胶质瘤 NGF p-TrkA c-fos 免疫组化免疫印迹 RT-PCR
分类号: R739.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的检测人脑胶质瘤组织内神经生长因子(nerve growth factor,NGF)及其与高亲和力受体酪氨酸蛋白激酶A(tyrosine kinase A,TrkA)结合后是否通过激活核转录因子激活蛋白1(activator protein 1,AP-1)来促进肿瘤细胞的增殖。通过探讨NGF参与胶质瘤(astrocytoma)发生的机制,为临床上降低NGF及其受体TrkA的表达及抑制相关传导通路来治疗胶质瘤提供理论依据。方法收集正常人脑组织标本10例及人脑胶质瘤标本34例。取得的标本每份分为两部分,一部分迅速放于-70℃保存备用,一部分经固定、脱水、透明、浸蜡、包埋之后做成切片行病理诊断同时将蜡块保存备用。胶质瘤标本按照2000年WHO脑胶质瘤分级标准分为I-IV级。其中I级7例、II级8例、III级10例、Ⅳ级9例。将石蜡切片用免疫组织化学方法检测NGF的蛋白表达情况。将冻存标本采用逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测NGF的mRNA相对表达量。并采用Western blotting方法检测磷酸化TrkA(p-TrkA)及核转录因子c-fos/AP-1的表达情况。结果1.病理形态学改变:光镜下正常对照组未见明显病理改变;胶质瘤I级组,肿瘤细胞分化良好,具有丰富的神经原纤维,很难见到核分裂像;胶质瘤Ⅱ级组肿瘤细胞有核异形;胶质瘤Ⅲ级组肿瘤细胞有核异形和核分裂相;胶质瘤Ⅳ级组肿瘤细胞有核异型、核分裂相及内皮增殖和坏死。根据镜下表现,确定病理级别。2.免疫组织化学染色:肿瘤细胞中NGF的阳性表达为粗细不均匀的棕黄色颗粒,分布于细胞质和胞核。NGF在各组之间的表达具有显著差异(P<0.01),其灰度值与其阳性表达程度成反比,表达程度由高到底顺序为:胶质瘤Ⅲ级组(105.80±19.00)、胶质瘤Ⅱ级组(119.30±20.88)、胶质瘤Ⅳ级组(130.70±13.77)、胶质瘤Ⅰ级组(138.50±14.17)、正常对照组(142.60±20.07)。3.RT-PCR:NGF mRNA在各组之间表达亦具有显著差异(P<0.05),其表达程度由高到底顺序与蛋白量在各组中的表达相一致:胶质瘤Ⅲ级组(1.68±0.17)、胶质瘤Ⅱ级组(1.49±0.18)、胶质瘤Ⅳ级组(1.38±0.24)、胶质瘤Ⅰ级组(1.20±0.29)、正常对照组(1.09±0.08)。4.Western blotting:灰度值与其阳性表达程度成反比,p-TrkA在各组均有表达,且各组之间表达具有显著差异(P<0.05),其表达程度由高到底顺序为:胶质瘤Ⅲ级组(1.09±0.10)、胶质瘤Ⅱ级组(1.14±0.02)、胶质瘤Ⅳ级组(4.77±0.24)、胶质瘤Ⅰ级组(5.29±0.35)、正常对照组(7.95±0.19)。c-fos/AP-1蛋白在各组中表达有显著差异性(P<0.05),其表达程度由高到底顺序为:胶质瘤Ⅳ级组(1.02±0.43)、胶质瘤Ⅲ级组(1.57±0.94)、胶质瘤Ⅱ级组(2.21±0.88)、胶质瘤Ⅰ级组(3.40±0.56)、正常对照组(8.26±1.50)。结论1. NGF在脑胶质瘤内的表达高于正常脑组织,并且在脑胶质瘤内的表达与胶质瘤的病理级别相关,阳性表达率由高到低依次为Ⅲ级、Ⅱ级、Ⅳ级、Ⅰ级。2. p-TrkA在脑胶质瘤内表达量与NGF一致,与胶质瘤的病理级别有关。3. c-fos/AP-1在正常脑组织和脑胶质瘤内均有表达,其表达程度随胶质瘤恶性程度的增高而增高。4. NGF可能通过与其受体TrKA结合后最终激活核转录因子AP-1来促进胶质瘤的发生发展。

全文目录

中文摘要  5-8
英文摘要  8-12
前言  12-15
材料与方法  15-24
结果  24-27
讨论  27-33
结论  33-34
附图  34-41
参考文献  41-47
综述  47-63
附录  63-64
攻读学位期间发表文章情况  64-65
致谢  65-66
个人简历  66

胶质瘤中NGF、TrkA的表达及作用机制

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