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不同培养时间对家猫卵母细胞体外成熟的影响

作　者: 邬静
导　师: 王新庄
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 临床兽医学
关键词: 家猫 卵母细胞 体外成熟培养时间 孤雌激活 皮质颗粒
分类号: S829.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


卵母细胞的体外成熟技术是辅助生殖技术的基础技术之一,是应用促性腺激素和类固醇激素在体外模拟卵泡环境,进而诱发卵母细胞成熟的一项生物技术。卵母细胞体外成熟培养是体外受精、卵母细胞孤雌激活、核移植等技术的基础。卵母细胞体外成熟的影响因素很多,成熟培养时间就是其中一个重要的影响因素。成熟培养时间短,卵母细胞的细胞核及胞质都未完全成熟,导致卵裂率、桑椹胚率、囊胚率、融合率等均较低;而培养时间过长则可能导致卵母细胞退化,同样也会引起卵裂率较低等现象。本试验以机体排出率、退化率结合孤雌激活为判定标准,比较不同培养时间对家猫卵母细胞体外成熟的影响,以确定最佳成熟时间。另外以皮质颗粒染色,进一步验证各培养时间的卵母细胞胞质成熟,更能说明最佳培养时间的原因。本研究主要得到以下结果:1家猫卵母细胞随着培养时间的延长其成熟率也随之增加。成熟培养43h,极体排出率极显著高于其他各组(P<0.01),达到66.89%;而24h组极体排出率为31.51%,极显著低于其他各组(P<0.01);28h (48.00%)、32h(45.45%)、36h(47.06%)各组间差异不显著(P>0.05)。经地衣红染色后,到达MⅡ期的卵母细胞比例与极体排出率趋势相同。43h组退化率极显著高于其他各组(22.30% vs 5.48%, 3.00%, 1.52%, 3.92%, P<0.01)。综合考虑成熟率和退化率两项指标,28h～36h为家猫卵母细胞体外核成熟的最佳培养时间。2成熟培养32h组的卵母细胞,经孤雌激活后的激活率最高,显著高于28h组(60.42% vs 43.16%, 0.01<P<0.05),但与36h组差异不显著(60.42% vs 50.00%, P>0.05);经孤雌激活的卵母细胞没有发育至囊胚的,32h组桑椹胚率最高达到15.63%,与其他两组差异不显著(7.36% , 10.78%)(P>0.05)。因此,家猫卵母细胞体外成熟培养32h,成熟效果最好。3不同培养时间的卵母细胞处于MⅡ期时,CGs分布于整个家猫卵母细胞中,并未出现无皮质颗粒区(CGFD);与其他各组相比,32h组卵母细胞皮质层中的CGs更多。所以,通过皮质颗粒染色证明32h组卵母细胞胞质成熟效果最好,32h是家猫卵母细胞体外成熟的最佳时间。

全文目录


摘要  5-6
ABSTRACT  6-11
第一章 文献综述  11-27
  1.1 研究目的及意义  11-12
  1.2 卵母细胞研究简史及发展现状  12
  1.3 哺乳动物卵母细胞成熟的机制及重要的调控分子  12-13
    1.3.1 哺乳动物卵母细胞成熟机制  12-13
    1.3.2 哺乳动物卵母细胞成熟过程中重要的调控分子  13
  1.4 卵母细胞成熟的判定方法  13-15
    1.4.1 卵母细胞核成熟的判断  13-14
    1.4.2 卵母细胞细胞质成熟的判断  14-15
    1.4.3 卵母细胞的基因表达  15
    1.4.4 观察卵母细胞的发育潜能  15
  1.5 影响卵母细胞体外成熟的因素  15-20
    1.5.1 卵母细胞的来源  15-16
    1.5.2 卵母细胞的采集方法  16-17
    1.5.3 卵巢的保存温度与运输温度  17-18
    1.5.4 成熟培养液及添加成分  18-19
    1.5.5 成熟培养条件  19-20
  1.6 哺乳动物孤雌激活发展简史及卵母细胞激活机理  20-22
    1.6.1 哺乳动物孤雌激活发展简史  20-21
    1.6.2 卵母细胞被激活的机理  21-22
  1.7 卵母细胞孤雌激活的方法  22-25
    1.7.1 钙离子载体激活  22
    1.7.2 电激活  22-23
    1.7.3 乙醇对卵母细胞的激活  23
    1.7.4 锶离子对卵母细胞的激活  23
    1.7.5 6-DAMP 和CHX 对卵母细胞的激活  23-24
    1.7.6 细胞松弛素B(CCB)对卵母细胞的激活  24
    1.7.7 透明质酸酶对卵母细胞的激活  24
    1.7.8 IP3 对卵母细胞的激活  24
    1.7.9 生物激活  24
    1.7.10 硫化汞对卵母细胞的激活  24-25
    1.7.11 物化联合激活  25
  1.8 卵母细胞的孤雌激活效果的影响因素  25
  1.9 家猫及其他猫科动物卵母细胞体外成熟及孤雌激活的发展简史  25-27
试验部分  27-42
  第二章 体外成熟培养时间对家猫卵母细胞核成熟的影响  27-32
    2.1 材料  27-28
      2.1.1 主要仪器和设备  27
      2.1.2 主要试剂  27-28
      2.1.3 试验材料  28
    2.2 方法  28-29
      2.2.1 卵巢及卵母细胞的采集  28
      2.2.2 卵母细胞成熟培养  28
      2.2.3 成熟培养后卵母细胞的观察  28-29
      2.2.4 数据统计与分析  29
    2.3 结果  29-30
      2.3.1 不同培养时间对家猫体外成熟的影响  29
      2.3.2 成熟培养后卵母细胞的观察  29-30
    2.4 讨论  30-32
  第三章 乙醇联合6-DMAP 孤雌激活验证成熟培养时间对家猫卵母细胞后续发育的影响  32-37
    3.1 材料  32-33
      3.1.1 主要仪器和设备  32
      3.1.2 主要试剂  32-33
      3.1.3 试验材料  33
    3.2 方法  33-34
      3.2.1 卵巢及卵母细胞的采集  33
      3.2.2 卵母细胞体外成熟培养  33
      3.2.3 乙醇联合6-DMAP 对卵母细胞的孤雌激活  33-34
      3.2.4 卵母细胞孤雌激活后的体外培养  34
      3.2.5 激活后卵母细胞发育潜力检测  34
      3.2.6 数据统计与分析  34
    3.3 结果  34-35
      3.3.1 成熟培养时间对家猫卵母细胞孤雌激活胚发育的影响  34
      3.3.2 H33342 染色观察激活后卵母细胞发育潜力  34-35
    3.4 讨论  35-37
  第四章 不同成熟培养时间对家猫卵母细胞皮质颗粒分布的影响  37-41
    4.1 材料  37
      4.1.1 主要仪器和设备  37
      4.1.2 主要试剂  37
      4.1.3 试验材料  37
    4.2 方法  37-38
      4.2.1 卵母细胞的采集与体外成熟培养  37
      4.2.2 卵母细胞的固定  37-38
      4.2.3 卵母细胞透明带透化  38
      4.2.4 卵母细胞皮质颗粒及细胞核的染色  38
    4.3 结果  38
    4.4 讨论  38-41
  结论  41-42
参考文献  42-52
致谢  52-53
个人简介  53

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 家畜 > 猫
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