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野油菜黄单胞菌ED途径相关基因研究

作　者: 谭旖宁
导　师: 唐纪良
学　校: 广西大学
专　业: 微生物学
关键词: 野油菜黄单胞菌胞外多糖 ED途径相关基因
分类号: S432.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

对野油菜黄单胞菌8004菌株全基因组序列进行搜索发现，该菌株拥有完整的ED、EMP、HMP等糖代谢途径。根据基因组注释，Xcc 8004基因组中编号为XC1973-XC1977的ORF分别是编码ED途径相关酶的eda，edd，pgl，glk，zwf基因。从本实验室构建的Xcc 8004 Tn5gusA5插入突变体库中，获得一株zwf基因的突变体167D10，该突变体EPS合成产量减少。为研究ED途径相关基因的功能，本工作采用自杀质粒pK18mob诱变XC1973-XC1977，获得这5个基因的非极性突变体NK1973-NK1977。对NK1973(eda~-)、NK1974(edd~-)、NK1976(glk~-)、NK1977(zwf)的相关酶活性进行检测，NK1973、NK1974的2-酮-3-脱氧6-磷酸葡萄糖酸醛缩酶及6-磷酸葡萄糖酸脱水酶组合酶活性分别比野生型8004菌株下降86％、92％，NK1976的葡萄糖激酶活性比野生型8004菌株下降95％，NK1977的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性比野生型8004菌株下降89％。采用不同碳源分析突变体的EPS产量，发现在以葡萄糖为主要碳源时，NK1973、NK1974、NK1976、NK1977的胞外多糖产量分别为2.155 g／L、4.280 g／L、1.100 g／L、4.260 g／L，比野生型8004菌株的9.657 g／L大幅度下降。用丙酮酸加葡萄糖、丙酮酸、果糖做主要碳源对NK1973-NK1977的胞外多糖产量进行检测，在前一种碳源中，NK1973-NK1977胞外多糖产量都比野生型8004菌株的大幅下降；在丙酮酸为碳源时，所有的突变体包括野生型8004菌株的胞外多糖产量都较少；在后一种碳源中，NK1976的胞外多糖产量高于野生型8004菌株，其它突变体的胞外多糖产量与野生型8004菌株比较结果与以葡萄糖为碳源时的结果相同。采用PCR分别扩增完整的XC1973、XC1974、XC1976和XC1977，获得的DNA片段连接在pLALR3上，分别互补NK1973、NK1974、NK1976和NK1977，能部分恢复胞外多糖产量。研究结果表明，Xcc 8004 ED途径影响胞外多糖合成产量。但在胞外多糖合成过程中的作用方式等问题都是未知的，有待进一步的研究。

野油菜黄单胞菌ED途径相关基因研究

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