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长春花四倍体的诱导及初步选育

作　者: 李铁军
导　师: 石俊英
学　校: 山东中医药大学
专　业: 中药学
关键词: 长春花秋水仙素四倍体生物碱
分类号: S682.19
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 44次
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内容摘要

目的:为提高长春花中有效成分-生物碱的含量,通过不同的方法诱导出长春花同源四倍体,为获得优质长春花四倍体株系打下基础。方法:以秋水仙素为诱导剂,考察不同浓度和不同的处理时间对诱导率的影响,诱导路线按照实体处理和离体处理两个方向展开,实体处理根据处理材料的不同分为对种子和实生苗顶芽的处理。离体诱导采用组织培养技术分别对种子、顶芽、愈伤组织进行处理。对获得的变异株通过形态、染色体计数、流式细胞术等方法进行鉴定,筛选出同源四倍体。并采用重量法和酸性染料法初步考察了获得的部分四倍体总生物碱含量的变化。结果与结论:各种诱导方法中,均有四倍体产生,其中毛细管法诱导实体幼苗的顶芽效果较好,0.1%秋水仙素处理72h和0.2%处理48h,四倍体的诱导率分别达到46%和58%。四倍体的性状发生了明显变化,茎、叶变大。综合各方法,从获得的同源四倍体中筛选出27株重点观察培养,20株结实留种以观察后代的稳定性,其余7株适时采收,进行总生物碱含量测定,其中5株总生物碱含量明显高于二倍体对照,最高达0.76%,比二倍体高出38%,基本反映了四倍体植株的总碱含量提高的趋势。对总碱含量高的四倍体应继续对其性状和总碱含量的进行跟代观察,以选出稳定的优良品系。

全文目录

提要  3-4
Abstract  4-9
引言  9-11
第一部分文献综述  11-25
  1 长春花的研究概况  11-15
    1.1 长春花简介  11-12
      1.1.1 长春花的形态特点  11
      1.1.2 长春花的栽培及分布情况  11-12
    1.2 长春花的药用成分、含量及药理作用  12-13
    1.3 长春花生物碱的获取方式  13-15
      1.3.1 直接从长春花植株中提取  13-14
      1.3.2 利用植物细胞工程产生生物碱  14
      1.3.3 利用遗传转化工程产生生物碱  14
      1.3.4 通过化学合成途径获得长春花生物碱  14-15
  2 药用植物多倍体育种的研究概况  15-25
    2.1 多倍体的特点  15-18
      2.1.1 巨大性、产量提高  15-16
      2.1.2 药用成分含量提高  16-17
      2.1.3 适应性、抗逆性增强  17
      2.1.4 育性下降  17-18
    2.2 多倍体育种的诱导方式  18-19
    2.3 研究概况  19-23
    2.4 长春花四倍体的研究概况  23-25
第二部分长春花四倍体的诱导  25-43
  1 实体处理  25-32
    1.1 对种子的诱导  25-28
      1.1.1 材料  25
      1.1.2 处理方法1  25
      1.1.3 处理方法2  25
      1.1.4 处理方法3  25
      1.1.5 结果  25-28
    1.2 对实生苗的诱导  28-32
      1.2.1 诱导方法1-毛细管法  28-30
        1.2.1.2 材料  28
        1.2.1.3 二倍体幼苗的培养  28
        1.2.1.4 处理方法  28
        1.2.1.5 结果  28-30
      1.2.2 诱导方法2-琼脂涂抹法  30-32
        1.2.2.1 材料  30
        1.2.2.2 方法与结果  30-32
      1.2.3 诱导方法3-成株顶芽浸渍  32
        1.2.3.2 材料  32
        1.2.3.3 方法  32
  2 离体处理  32-42
    2.1 对种子的诱导  32-36
      2.1.1 灭菌剂的选择  32-34
      2.1.2 处理材料及培养基  34
      2.1.3 处理方法l及结果  34-36
      2.1.4 处理方法2及结果  36
    2.2 通过顶芽进行诱导  36-38
      2.2.2 生根培养基的选择  36
      2.2.3 处理材料及培养基  36
      2.2.4 处理方法及结果  36-38
    2.3 通过愈伤组织途径进行诱导  38-42
      2.3.1 愈伤组织的诱导  38-40
        2.3.1.1 材料与诱导培养基  38-39
        2.3.1.2 方法及结果  39-40
      2.3.2 丛生芽的诱导与增殖  40
        2.3.2.1 材料与培养基  40
        2.3.2.2 方法与结果  40
      2.3.3 四倍体的诱导  40-42
        2.3.3.1 材料  40
        2.3.3.2 方法及结果  40-42
  3 小结与讨论  42-43
第三部分长春花四倍体的鉴定  43-53
  1 形态学鉴定法  43-45
    1.1 叶的变化  43-44
      1.1.1 形态的改变  43
      1.1.2 重量的改变  43
      1.1.3 长春花四倍体与二倍体干重的比较  43-44
    1.2 茎与花的变化  44
    1.3 种子的变化  44
      1.3.1 大小及重量的改变  44
      1.3.2 结实率的变化  44
    1.4 实生苗性状稳定性的初步观察  44-45
  2 细胞学鉴定  45-47
    2.1 气孔保卫细胞叶绿体计数  45-46
      2.1.1 材料与方法  45
      2.1.2 结果  45-46
    2.2 四倍体花粉粒的形态观察  46-47
  3 染色体计数法  47-49
    3.1 材料与试剂  47-48
    3.2 方法  48
    3.3 结果  48-49
  4 流式细胞仪分析法  49-53
    4.1 材料  49
    4.2 细胞核分离液选择  49-52
    4.3 方法与结果  52-53
第四部分长春花四倍体总生物碱含量的测定  53-57
  1 方法一: 提取称重  53-55
    1.1 材料  53
    1.2 仪器与试剂  53
    1.3 方法  53-54
    1.4 结果  54-55
  2 方法二: 酸性染料比色法  55-57
    2.1 仪器与试剂  56
    2.2 方法  56
    2.3 结果  56-57
结果与讨论  57-59
效益分析报告  59-61
参考文献  61-67
致谢  67-68
查新报告  68-75
论文著作  75-82
科研课题  82-86
详细摘要  86-91

长春花四倍体的诱导及初步选育

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