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二氢卟吩e6载药胶束的制备与评价

作　者: 蒋小红
导　师: 胡富强
学　校: 浙江大学
专　业: 药剂学
关键词: 壳聚糖硬脂酸嫁接物胶团二氢卟吩e6 细胞摄取体外释放叶酸
分类号: TQ460.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

聚合物胶团系两亲性嵌段或接枝共聚物,在水性介质中自发形成核-膜结构的胶粒,共聚物的疏水片段形成胶粒的内核,亲水片段形成外膜。聚合物胶团的内核可以作为疏水性药物的储库,将药物增溶在核心,外膜可以维持胶团在水性环境中的稳定性,对药物起保护作用,提高药物的稳定性,聚合物胶团对药物具有缓释作用。胶团特有的纳米级粒径可有效促进聚合物胶团的“渗透与保留作用”,赋予其被动靶向肿瘤组织的功能,同时通过对聚合物胶团表面进行配体或抗体修饰可帮助其达到主动靶向的目的。聚合物胶团对难溶性药物、大分子药物和基因治疗药物在载体给药方面具有独特的优势,与传统的低分子量表面活性剂相比,聚合物胶团具有更低的临界胶团浓度,因而在体循环中具有更高的稳定性。本研究以18.0 KDa的低分子量壳聚糖(chitosan oligosaccharide,CSO)为原料,以碳二亚胺为偶合剂,将硬脂酸(stearic acid,SA)的羧基以共价键的形式结合到壳聚糖链的游离氨基上,得到壳聚糖硬脂酸嫁接物(stearic acid grafted chitosanoligosaccharide copolymer,CSO-SA)。以三硝基苯磺酸法测定嫁接物氨基取代度;以芘荧光法测定该嫁接物在水中的临界胶团浓度;以荧光淬灭法测定该嫁接物在水中自聚集后形成的疏水核区域数;以微粒粒度及表面电位分析仪测定嫁接物胶团在水中的粒径与表面电位。同时以光敏剂二氢卟吩e6(chlorin e6,Ce6)为模型药物,进行嫁接物胶团载药性能研究。考察胶团载药前后粒径与表面电位变化,并进行包封率测定。以A549为模型细胞进行嫁接物胶团的细胞摄取实验。利用壳聚糖链游离氨基和叶酸分子游离羧基的反应活性,对壳聚糖硬脂酸嫁接物进行叶酸修饰,考察叶酸修饰前后嫁接物胶团理化性质的变化。以A549(FR=(-)),MCF-7(FR=32%)细胞系为模型细胞,考察叶酸修饰对细胞选择性摄取嫁接物胶团的影响。以二氢卟吩e6为模型药物,考察叶酸修饰对胶团载药行为和细胞摄取的影响。经生物酶降解得到重均分子量为18.0 KDa的低分子量壳聚糖在水中具有良好的溶解性。采用偶合反应对其进行疏水性修饰,得到氨基取代度为4.96%±0.10%的壳聚糖硬脂酸嫁接物(CSO-SA),在水中的临界胶团浓度为36.27±1.51μg/mL。1.0 mg/mL浓度的嫁接物胶团溶液中,单个CSO-SA分子形成的疏水性微区域数为4.55个。1.0 mg/mL浓度的嫁接物胶团溶液,其数均粒径为28.9 nm,表面电位为39.1±0.5 mV。叶酸修饰的壳聚糖硬脂酸嫁接物,可以提高嫁接物在水中的自聚能力,并进一步增加单个嫁接物分子形成的疏水核数。A549(FR=(-)),MCF-7(FR=32%)细胞系对嫁接物载药胶团的药物摄取实验结果表明,叶酸分子的表面修饰,使肿瘤细胞A549对药物的摄取无明显影响,但显著增加了叶酸受体过表达的肿瘤细胞MCF-7(FR=32%)对药物的摄取百分率。叶酸分子的表面修饰,对Ce6载药胶团的药物包封率和载药量无影响,但在一定程度上减少了药物的体外释放量。以Hela细胞系为模型细胞,采用四唑蓝比色法考察Ce6包载前后的细胞毒性。在无光照条件下,Ce6在CSO-SA和FA-CSO-SA包载后,对Hela细胞的24h半数致死量增加,说明载药胶团可以降低药物的毒性。在光照条件下,Ce6、CSO-SA/Ce6和FA-CSO-SA/Ce6对Hela细胞的毒性作用明显增加。FA-CSO-SA/Ce6的安全系数最大,说明采用较小的光敏剂量就可以达到与游离药物相当的光动力效应,并可降低药物的毒副作用。

全文目录

致谢  4-5
中文摘要  5-7
英文摘要  7-10
目次  10-13
引言  13-16
第一章壳寡糖硬脂酸嫁接物的合成与理化性质研究  16-24
  1.1 材料与仪器  16-17
  1.2 实验方法  17-18
    1.2.1 壳寡糖硬脂酸嫁接物的合成  17
    1.2.2 壳寡糖硬脂酸嫁接物的理化性质研究  17-18
  1.3 结果与讨论  18-23
    1.3.1 嫁接物氨基取代度  18-19
    1.3.2 嫁接物临界胶团浓度  19-20
    1.3.3 嫁接物胶团粒径与表面电位  20-21
    1.3.4 嫁接物疏水核数  21-23
    1.3.5 嫁接物的形态  23
  1.4 小结  23-24
第二章壳聚糖硬脂酸嫁接物载药胶团的细胞摄取和载药行为研究  24-35
  2.1 材料与仪器  24-25
  2.2 实验方法  25-27
    2.2.1 二氢卟吩e6含量测定  25
    2.2.2 二氢卟吩e6载药胶团制备  25
    2.2.3 载药纳米粒包封率的测定  25
    2.2.4 粒径与表面电位测定  25-26
    2.2.5 载药纳米粒体外释放  26
    2.2.6 载药胶团的细胞摄取药物动力学  26-27
  2.3 结果与讨论  27-33
    2.3.1 二氢卟吩e6含量测定  27-28
    2.3.2 载药胶团的包封率  28
    2.3.3 载药胶团的粒径和表面电位  28-29
    2.3.4 载药胶团的药物体外释放行为  29-31
    2.3.5 载药胶团的细胞摄取药物动力学  31-33
  2.4 小结  33-35
第三章壳聚糖硬脂酸嫁接物的叶酸修饰研究  35-47
  3.1 材料与仪器  35-36
  3.2 实验方法  36-39
    3.2.1 叶酸修饰壳聚糖硬脂酸嫁接物的合成  36
    3.2.2 叶酸修饰壳聚糖硬脂酸嫁接物的理化性质评价  36-37
    3.2.3 叶酸修饰嫁接物载药胶团的制备及理化性质考察  37-38
    3.2.4 叶酸修饰嫁接物载药胶团的药物体外释放研究  38
    3.2.5 叶酸修饰嫁接物载药胶团的细胞摄取研究  38-39
  3.3 结果与讨论  39-46
    3.3.1 叶酸修饰壳聚糖硬脂酸嫁接物的理化性质  39-43
    3.3.2 叶酸修饰嫁接物载药胶团的包封率  43
    3.3.3 叶酸修饰嫁接物载药胶团的药物体外释放行为  43-44
    3.3.4 叶酸修饰嫁接物载药胶团的细胞摄取行为  44-46
  3.4 小结  46-47
第四章壳聚糖硬脂酸嫁接物载药胶团的细胞光动力效应研究  47-54
  4.1 材料与仪器  47
  4.2 实验方法  47-49
    4.2.1 细胞培养  47-48
    4.2.2 载药胶团的细胞毒性  48-49
  4.3 结果与讨论  49-53
    4.3.1 载药胶团对细胞毒性的荧光显微镜观察  49-50
    4.3.2 载药胶团对细胞毒性作用  50
    4.3.3 载药胶团在光照条件下对细胞毒性作用  50-53
  4.4 小结  53-54
结论  54-56
参考文献  56-59
综述  59-75
作者简介  75

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