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小鼠转录因子MDFIC蛋白的分析及研究

作　者: 刘向东
导　师: 周天鸿
学　校: 暨南大学
专　业: 遗传学
关键词: C3H10T1/2 MDFIC I-mfa结构域亚细胞定位
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 17次
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内容摘要

鼠MDFIC(MyoD family inhibitor domain containing)基因是一个近年来新发现的基因；其蛋白具有MyoD抑制素结构域(Ⅰ-mfa domain),故命名为MDFIC。对其的研究工作仅限于cDNA序列的测序和Genebank的登录。MDFIC是人HIC基因(MyoD family inhibitor domain containing)的鼠基因类似物(orthologue),其Ⅰ-mfa结构域可能在起功能发挥中担任中重要角色。mRNA序列分析表明：由于潜在的选择性翻译起始位点,Mdfic基因可能编码Mdficp26和p34、p37及p38四种蛋白。生物信息学分析表明该四种蛋白均不存在核定位信号。构建pEYFP-N1-MDFIC p26, pEGFP-N1-MDFICp37融合蛋白表达质粒,进而转染C3H10T1/2细胞,实验证明MDFIC主要分布在细胞质中。使用自制的MDFIC多抗检测内源性MDFIC蛋白的亚细胞定位,免疫荧光和蛋白质印迹实验表明内源MDFIC亦主要定位于细胞质中。进一步构建pEYFP-C1-myogenin、pEYFP-C1-MyoD1, pECFP-N1-MDFIC (p26)融合蛋白表达质粒,单独转染或共转染C3H10T1/2细胞,免疫荧光实验证明单独的MyoDl和myogenin均定位于细胞核中,而将MyoDl和MDFIC或者myogenin和MDFIC共转染后,MDFICp26将MyoDl和myogenin滞留在细胞质中,暗示MDFICp26可能与myod家族相互结合进而能调控相关发育进程。

全文目录

中文摘要  4-5
英文摘要  5-6
目录  6-8
1 前言  8-12
  1.1 有关MDFIC的研究进展  8
  1.2 MoyD家族及肌细胞发生的调控  8-10
  1.3 I-mfa结构域及相关蛋白  10-11
  1.4 研究意义  11-12
2 基本思路  12
3 实验技术路线简图  12-13
4 实验部分  13-47
  4.1.主要仪器  13-14
  4.2 实验材料  14-15
  4.3 主要溶液的配制  15-18
  4.4 实验方法  18-47
    4.4.1 Mdfic的信息学分析  18
    4.4.2 pEYFP-N1-MDFIC(p26)/pEGFP-N1-MDFIC(p37)表达载体的构建  18-33
    4.4.3 MDFIC蛋白亚型的亚细胞的分布研究  33-35
    4.4.4 MDFIC的蛋白印迹实验  35-37
    4.4.5 MDFIC和MyoD家族之间的相互作用  37-47
5 实验结果  47-66
  5.1 MDFIC的生物信息学分析  47-52
  5.2 pEYFP-N1-MDFIC(p26)和pEGFP-N1-MDFIC(p37)表达载体的构建  52-55
  5.3 外源MDFIC在细胞中的定位  55-58
  5.4 内源MDFIC在细胞内的定位  58-59
  5.5 MDFIC的蛋白印迹实验  59
  5.6 MDFIC和MyoD家族之间的相互作用  59-66
6. 讨论  66-69
  6.1 MDFIC生物信息学的分析  66-67
  6.2 MDFIC与MyoD家族的相互作用  67-69
7. 小结  69-70
参考文献  70-73
附录  73-86
致谢  86

小鼠转录因子MDFIC蛋白的分析及研究

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