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盾壳霉（Coniothyrium Minitans）固态培养研究

作　者: 唐兴芳
导　师: 师俊玲
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 食品科学
关键词: 盾壳霉固态培养色氨酸麸皮苹果渣孢子产量
分类号: S476
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

菌核病是一种由核盘菌[Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary]引发的主要病害病,油菜菌核病对我国油菜生产造成很大的危害,盾壳霉对菌核病具有显著防治效果,对其生理特性、生防机理、规模培养、孢子产生等方面的研究日新月异。分生孢子是盾壳霉赖以延续后代和长期保存活性的主要生物体形式,盾壳霉主要通过孢子对油菜菌核病菌的侵入与萌发,以达到生物防治的作用。要实现盾壳霉的大规模生产与应用的前提条件就是,获得足量的分生孢子。于是,如何大量而有效地培养盾壳霉的分生孢子就成为需要研究的另一个主题。基于此,本文研究了盾壳霉的培养条件、模式、营养添加、廉价培养基的选用等相关固态培养技术进行研究,为大批量地获得盾壳霉孢子提供参考,以期对盾壳霉作为生物农药用于生产实践做出有益的探索。以盾壳霉为丝状菌模式菌株,采用惰性支撑介质与膜培养相接合的固态膜式培养,结果表明在固态膜式培养体系中,菌丝体与培养基可分开,且对菌体正常生长和孢子形成没有不良影响,甚至能提高孢子产量;新式培养皿的使用,更便于对培养过程中菌丝生长量、孢子产量、底物消耗、pH变化等相关参数的定量测定,也有利于进行提高孢子产量方面的研究;半连续化培养方法的探索,可达到对类固态培养条件下循环发酵的效果进行研究的目的;这种膜培样技术在实验室条下研究丝状菌的生长特性及实现连续化、半连续化培养发酵方面具有很大的应用潜力。通过在盾壳霉丝状菌固态膜式培养中以不同的浓度、添加量、添加时间添加色氨酸,考察其对盾壳霉孢子产量的影响,以确定通过添加色氨酸来提高盾壳霉孢子产量的培养策略。结果表明在一定的浓度范围内,添加一定量的色氨酸有助于提高盾壳霉的孢子产量。当培养基中色氨酸初始浓度高于0.50g/L时,就会对盾壳霉的孢子产量形成一定的抑制作用;色氨酸的最适添加量为0.10g/L;在盾壳霉生长第3.5天开始有孢子成熟到第4天孢子大量成熟时期是添加色氨酸的最佳时间,能有效促进盾壳霉孢子的大量生成。在以麸皮作为培养基的固态培养试验中,通过中间补加葡萄糖,考察其对培养结果的影响,特别是对孢子产量的影响。结果表明在开始培养阶段不同初始葡萄糖浓度的培养基对盾壳霉的生长有着明显的区别,确定盾壳霉在麸皮培养基上生长所需的葡萄糖初始浓度应该在4%─8%之间,在培养的过程中采用中途补加葡萄糖粉的方法来提高盾壳霉的产量,延长生长稳定期;根据盾壳霉的培养基中还原糖的变化曲线结合盾壳霉孢子的生长曲线变化说明,在培养后的第三天时添加培养基干重的1.5%时对促进孢子产量效果最为显著。通过对苹果渣水洗次数、初始pH、添加尿素、碳酸钙以及盾壳霉种龄的不同,研究了盾壳霉以苹果渣为培养基的固态培养工艺条件。结果表明理想工艺模式为苹果果渣用4倍水洗一次→调节初始pH6.0→加入碳酸钙15g/kg或脲素25g/kg→灭菌→接入在PDB中培养3d的盾壳霉孢子→20℃培养10d→含盾壳霉孢子培养物(约1×109孢子/g培养物)。

盾壳霉（Coniothyrium Minitans）固态培养研究

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