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人脂肪细胞对HepG2细胞载脂蛋白A5表达的影响及其机制
作 者: 秦英楠
导 师: 李向平
学 校: 中南大学
专 业: 心血管内科
关键词: 脂肪细胞 HepG2细胞 载脂蛋白A5 过氧化物酶增殖物激活受体-α 炎症因子
分类号: R589.2
类 型: 硕士论文
年 份: 2010年
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内容摘要
目的本实验采用人脂肪细胞与HepG2细胞共培养模型,探讨在共培养情况下,脂肪细胞对HepG2细胞载脂蛋白A5 (apoA5)表达的影响及其调节机制。方法采用基质血管组分(SVF)细胞培养法,在人皮下脂肪组织中获得前脂肪细胞,用含3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)、胰岛素和地塞米松的标准诱导剂刺激后,前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞,并用脂多糖(LPS)刺激成熟脂肪细胞使其成为炎症状态下脂肪细胞。通过Transwell系统,取成熟脂肪细胞和炎症状态下脂肪细胞分别与HepG2细胞共培养,收集HepG2细胞,提取RNA,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定apoA5、血清淀粉样蛋白A (SAA)、过氧化物酶增殖物激活受体-α(PPAR-α)、肝X受体-α(LXR-α) mRNA表达,并观察PPAR-α抑制剂MK886对HepG2细胞apoA5、PPAR-αmRNA表达的影响。结果1.成熟脂肪细胞与HepG2细胞共培养(24h、48h),可使HepG2细胞apoA5、PPAR-α、SAA mRNA的表达升高,与对照组(未共培养组)相比差异有统计学意义(P均<0.05),且共培养48h后表达水平高于24h(P均<0.05),但在共培养24h和48h后LXR-αmRNA的表达与对照组相比均无明显改变(P均>0.05)。2.与HepG2细胞共培养48h后,炎症状态下脂肪细胞对HepG2细胞apoA5、PPAR-α、SAA mRNA表达的上调作用比成熟脂肪细胞更强(P均<0.05),但LXR-αmRNA表达无明显变化(P均>0.05)。3. PPAR-α抑制剂MK886可抑制成熟脂肪细胞和炎症状态下脂肪细胞对HepG2细胞apoA5 mRNA表达的上调作用(P均<0.05)。结论1.成熟脂肪细胞可上调HepG2细胞apoA5 mRNA的表达,且呈时间依赖性。2.炎症状态下脂肪细胞上调HepG2细胞apoA5 mRNA表达的作用强于成熟脂肪细胞。3.脂肪细胞可上调HepG2细胞apoA5 mRNA的表达,可能是其分泌的炎症因子刺激所致,且HepG2细胞apoA5表达的量与炎症因子剌激的时间和强度有关。4.脂肪细胞对HepG2细胞apoA5 mRNA表达的影响可能是通过PPAR-α途径实现,而不是通过LXR-α途径。
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全文目录
中文摘要 4-6 英文摘要 6-9 缩略语 9-10 第一章 前言 10-12 第二章 材料和方法 12-21 2.1 研究对象 12 2.2 仪器设备与试剂 12-14 2.3 各种溶液的配制 14-15 2.4 实验方法 15-20 2.5 统计学分析 20-21 第三章 实验结果 21-26 3.1 脂肪细胞的培养及鉴定 21-22 3.2 RT-PCR检测共培养对HepG2细胞apoA5、PPAR-α、LXR-α、SAA mRNA表达的影响 22-26 第四章 讨论 26-29 第五章 结论 29-30 参考文献 30-34 综述 34-45 致谢 45-46 攻读学位期间获奖情况 46
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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 内分泌腺疾病及代谢病 > 代谢病 > 脂肪代谢障碍
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