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羊肉产品肉种来源的分子追溯研究

作　者: 冯海永
导　师: 韩建林
学　校: 中国农业科学院
专　业: 动物遗传育种与繁殖
关键词: 分子追溯 mtDNA 多重PCR PCR-RFLP
分类号: S826
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 68次
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内容摘要

本研究在综述食品中原料肉物种鉴别方法研究现状的基础上,对用苯酚-氯仿法、高盐法和试剂盒法从羊肉产品中提取DNA的效果进行了比较,建立了检验猪、普通牛、山羊、绵羊、鸡、牦牛和马肉的七重PCR反应体系,对9种生羊肉制品和10种熟羊肉制品进行了检测,并用DNA测序方法进行了验证,然后还建立了一种可快速鉴别羊肉和鸭肉的PCR-RFLP方法。主要结果如下:1.三种方法(酚-氯仿法、高盐法和试剂盒法)提取羊肉产品DNA的效果差异不大,试剂盒法最快。2.采用常规的琼脂糖凝胶电泳可以区分片段大小介于157～517 bp、相互差异在41 bp以上的多重mtDNA Cyt b基因的PCR扩增产物,从而实现对这7个物种(猪、普通牛、山羊、绵羊、鸡、牦牛和马)的快速、准确及同步鉴别;对3个物种(普通牛、牦牛和山羊)DNA的检测灵敏度在2.5 ng左右。3.用七重PCR对19种市售羊肉产品进行了检测,共有5种产品与标签不符,其中2种熟羊肉制品掺有普通牛肉,1种生肉产品掺杂有鸡肉,而2种标注为生绵羊肉的产品却掺有山羊肉。4.通用引物从鸭和羊的DNA中均可扩增出线粒体Cyt b基因的472 bp片段,经内切酶Bsu36I和SpeI酶切后,绵、山羊与鸭的PCR扩增产物分别被切为不同大小的片段,其中鸭被切为95 bp和377 bp,而绵、山羊均被切为146 bp和326 bp。这表明PCR-RFLP分析线粒体DNA Cyt b基因的方法简单,结果可靠,可作为鉴别鸭肉和羊肉的快速方法。

全文目录

摘要  6-7
Abstract  7-11
英文缩略表  11-12
第一章绪论  12-20
  1.1 羊肉产品掺假检测的研究意义  12-13
  1.2 原料肉种属鉴别的研究方法  13-17
    1.2.1 感官水平  13-14
    1.2.2 蛋白水平  14-15
    1.2.3 DNA 水平  15-17
  1.3 羊肉价值及我国市场情况  17-19
    1.3.1 羊肉价值  17
    1.3.2 我国羊肉市场情况  17-18
    1.3.3 打击羊肉掺假的相关法律依据  18-19
  1.4 本研究的切入点及主要研究内容  19-20
第二章羊肉产品中提取DNA 的方法比较  20-25
  前言  20
  2.1 材料与方法  20-22
    2.1.1 供试材料  20
    2.1.2 主要仪器设备  20
    2.1.3 主要试剂  20-21
    2.1.4 溶液配制  21
    2.1.5 酚-氯仿法提取DNA  21
    2.1.6 高盐法提取DNA  21-22
    2.1.7 试剂盒法提取DNA  22
    2.1.8 DNA 提取效果检测  22
  2.2 结果与分析  22-24
    2.2.1 酚-氯仿法提取DNA 电泳检测结果  22-23
    2.2.2 高盐法提取DNA 电泳检测结果  23
    2.2.3 酚-氯仿法与试剂盒法提取DNA 效果比较  23-24
  2.3 讨论  24-25
第三章七重PCR 检测方法的建立  25-32
  前言  25
  3.1 材料与方法  25-28
    3.1.1 供试样品  25
    3.1.2 主要仪器设备及试剂  25-26
    3.1.3 引物  26
    3.1.4 单PCR 扩增验证引物  26
    3.1.5 六重PCR 扩增  26-27
    3.1.6 山羊、绵羊和牦牛引物的设计  27
    3.1.7 七重PCR 体系的优化  27
    3.1.8 普通牛、牦牛和山羊DNA 的七重PCR 灵敏度检测  27-28
  3.2 结果与分析  28-30
    3.2.1 单PCR 扩增结果与分析  28
    3.2.2 六重PCR 扩增结果与分析  28-29
    3.2.3 七重PCR 体系优化结果  29-30
    3.2.4 普通牛、牦牛和山羊DNA 的七重PCR 灵敏度检测  30
  3.3 讨论与结论  30-32
    3.3.1 种属特异引物的设计及多重PCR 体系的优化  30-31
    3.3.2 多重PCR 技术的特点  31
    3.3.3 结论  31-32
第四章七重PCR 方法检测19 种羊肉产品  32-39
  前言  32
  4.1 材料与方法  32-34
    4.1.1 样品的采集  32-33
    4.1.2 主要仪器设备与试剂  33
    4.1.3 DNA 的制备与检测  33
    4.1.4 七重PCR 方法检测羊肉产品掺假  33-34
    4.1.5 测序法检测  34
  4.2 结果与分析  34-36
    4.2.1 DNA 提取效果检测  34
    4.2.2 多重PCR 方法检测  34-36
    4.2.3 测序方法检测结果  36
  4.3 讨论与结论  36-39
    4.3.1 抽样  36-37
    4.3.2 羊肉产品检测分析  37-39
第五章 PCR-RFLP 分析Cyt b 基因用于绵、山羊和鸭肉的鉴别  39-43
  前言  39
  5.1 材料与方法  39-40
    5.1.1 试验材料  39
    5.1.2 仪器设备  39
    5.1.3 基因组DNA 的准备  39
    5.1.4 万能引物扩增山羊、绵羊和鸭DNA  39-40
    5.1.5 内切酶的选择及PCR-RFLP 分析  40
  5.2 结果与分析  40-41
    5.2.1 万能引物扩增山羊、绵羊和鸭DNA 的结果  40
    5.2.2 PCR-RFLP 结果  40-41
  5.3 讨论  41-42
    5.3.1 PCR-RFLP 分子标记和限制性内切酶的选择  41-42
    5.3.2 PCR-RFLP 技术的优点及本工作的不足  42
  5.4 结论  42-43
第六章全文结论  43-44
参考文献  44-48
致谢  48-49
作者简历  49

羊肉产品肉种来源的分子追溯研究

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