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人工合成多肽FGL和IKVAV促进损伤脊髓功能恢复的实验研究

作　者: 付洪龙
导　师: 陈伯华
学　校: 青岛大学
专　业: 外科学
关键词: 肾上腺嗜铬细胞瘤细胞 FGL多肽星形胶质细胞 IKVAV多肽硫酸软骨素蛋白多糖（CSPGS）NG2
分类号: R651.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

研究目的通过体外和体内两种方式探讨多肽FGL和IKVAV对脊髓损伤后恢复的影响。研究方法设计并人工合成FGL和IKVAV多肽和对照肽。1①培养神经细胞模型PC-12细胞,分为对照组和实验组,实验组中加入FGL多肽溶液。对照组预先用多聚赖氨酸包被培养板。分别于培养1、3、5、7、9d后采用细胞增殖检测CCK-8法检测两组细胞增殖情况。②取PC-12细胞。分为三组,正常对照组不作处理,损伤对照组加入H2O2刺激16h。实验组先加入FGL多肽预孵育30 min,再加H2O2刺激16h。流式细胞仪检测两组细胞凋亡情况；荧光定量PCR法检测PC-12中的核因子NF-κB mRNA。2培养星形性胶质细胞,将细胞分为对照组和实验组。对照组正常培养,实验组加入IKVAV人工合成多肽,检测两组细胞存活情况。②制作细胞划伤模型,分为正常组、对照组、实验组,正常组不作任何处理,对照组做划伤处理,实验组加入IKVAV培养一天后,制作划伤模型,三天后提取各组细胞mRNA,荧光定量PCR检测GDNFmRNA表达变化。3方法将45只大鼠随机分成三组,A组为假手术组,B组为多肽FGL和IKVAV对照肽组,C组为多肽FGL和IKVAV干预组,采用原位杂交和Western blotting免疫印迹分析脊髓损伤后硫酸软骨素蛋白多糖(CSPGS) NG2的表达；采用BBB评分法对大鼠瘫痪后肢进行运动功能评估。研究结果1实验组培养1、3、5、7、9d PC-12增殖数量均高于对照组。H2O2处理后,实验组PC-12凋亡数量及其中NF-κB mRNA的表达量均低于对照组。2 IKVAV多肽组可存活率达95%以上,实验组和对照组细胞活性没有明显差异,在划伤实验中,实验组细胞GDNF表达明显高于对照。3原位杂交和Western blotting结果显示假A组CSPGS NG2表达较弱,B组CSPGS NG2显著增多,C组给予多肽FGL干预后CSPGs NG2表达明显减弱,Western blotting结果验证了瘫痪后肢运动明显改善(均P<0.05)。结论1多肽FGL可促进PC-12细胞增殖,并抑制其凋亡2人工合成多肽IKVAV对细胞活性没有影响,可促进划伤星形胶质细胞分泌神经营养因GDNF。3多肽FGL和IKVAV可以通过减少CSPGS NG2表达促进脊髓损伤大鼠后肢运动功能恢复。

全文目录

摘要  2-3
Abstract  3-5
引言  5-6
第一章材料与方法  6-15
  1.1 实验材料  6-7
  1.2 实验仪器  7-8
  1.3 细胞培养  8-10
  1.4 实验方法  10-15
第二章实验结果  15-18
第三章讨论  18-21
结论  21-22
参考文献  22-25
综述  25-35
  综述文献  32-35
攻读学位期间的研究成果  35-36
附录  36-41
致谢  41-42

人工合成多肽FGL和IKVAV促进损伤脊髓功能恢复的实验研究

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