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体外诱导视网膜干细胞及间充质干细胞向视网膜神经上皮细胞分化的研究

作　者: 张慧
导　师: 董方田
学　校: 北京协和医学院
专　业: 临床医学
关键词: 视网膜干细胞人脂肪间充质干细胞体外诱导神经节细胞光感受器细胞
分类号: R774.1
类　型: 博士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的：探讨和比较视网膜干细胞(RSCs)及人脂肪间充质干细胞(AMSCs)向视网膜神经上皮分化的体外诱导。方法：用胰蛋白酶分离新生5天(PN5)大鼠视网膜混合细胞,用贴壁培养法,在10%FBS的DMEM/F12培养基中传代培养,经过连续传代,纯化和诱导细胞。采用上述方法诱导分离的节细胞作为细胞环境,通过EGF+bFGF+B27的DMEM/F12无血清体系,诱导人脂肪间充质干细胞。用悬浮法培养胚鼠视网膜干细胞,用EGF和牛磺酸诱导分别RSCs和AMSCs。通过免疫荧光和RT-PCR鉴定诱导细胞的分化情况。结果：PN5大鼠视网膜混合细胞具有发育成熟RGCs.光感受器及胶质细胞,但仍存在具有干细胞性质表达Nestin和Musashi的RSCs。经10%FBS传代诱导后,细胞形态一致,表达Thy-1、Tuj1及Nogo-R,蛋白和mRNA具有RGCs表型。经分离的节细胞诱导,AMSCs出现具有神经细胞特征形态的变化,在蛋白水平表达了Tuj1及视紫红质,并且在mRNA水平上表达了Nestin。在低血清环境中,视网膜干细胞经牛磺酸和EGF诱导表达了Thy-1、Tuj1和GS,而间充质干细胞经EGF诱导表达了神经前体细胞标志物Tuj1及胶质细胞标志物GS。结论：在体外分离PN5的SD大鼠视网膜混合细胞成分符合PN5的视网膜发育。PN5的视网膜混合细胞中仍存在RSCS。通过高血清体系的传代诱导,可得到具有RGCs表型的细胞。AMSCs在视网膜类节细胞的环境下,可诱导表达神经前体细胞的标志物及光感受器细胞的标志物。牛磺酸和EGF都对RSCs向视网膜神经层分化有促进作用,而且EGF对AMSCs向神经分化的作用更为显著。RSCs与AMSCs相比更易分化为视网膜神经上皮细胞。为干细胞用于视网膜移植的细胞供体,提供了体外诱导的依据。

全文目录

英文缩略词表  4-6
摘要  6-7
Abstract  7-8
前言  8-10
第一部分：高血清培养体系对新生大鼠视网膜混合细胞的分离、培养和鉴定  10-19
  材料  10-12
  方法  12-15
  结果  15-19
第二部分：类节细胞对人脂肪间充质干细胞向视网膜神经上皮细胞分化的体外诱导  19-24
  材料  19-20
  方法  20-21
  结果  21-24
第三部分：视网膜干细胞及人脂肪间充质干细胞体外诱导的比较  24-32
  材料  24-25
  方法  25-27
  结果  27-32
讨论  32-38
结论  38-39
参考文献  39-44
综述  44-57
  参考文献  52-57
致谢  57-58

体外诱导视网膜干细胞及间充质干细胞向视网膜神经上皮细胞分化的研究

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