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人脐带华尔通氏胶源间充质干细胞向男性生殖细胞诱导分化的研究

作　者: 黄鹏
导　师: 马廉
学　校: 汕头大学
专　业: 儿科学
关键词: 人脐带间充质干细胞精原细胞体外诱导体内移植男性不育症
分类号: R329
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

[背景与目的]生殖细胞缺陷所致的男性不育症是目前临床难于攻克的疾病,传统辅助生殖技术尚无法从根本上解决此类病人的生育问题,精原干细胞移植是突破这一瓶颈的理想途径。人脐带间充质干细胞具有多向分化潜能,一定条件下可向三个胚层组织细胞分化,前期的研究表明,人脐带间充质干细胞在体外诱导后表达部分生殖细胞标记,移植到不育小鼠体内不发生排斥反应,且可发生迁移并能存活至少120天。本研究将在前期研究的基础上,进一步探讨人脐带间充质干细胞在体内外向精原细胞的分化潜能及其生物学特性。[材料与方法]采用差异贴壁法分离、培养、扩增出人脐带间充质干细胞,流式细胞术检测干细胞相关标记表达情况；利用新生小鼠睾丸细胞培养液、维甲酸、睾酮作为条件诱导液,将人脐带间充质干细胞在条件诱导液中培养,显微镜观察诱导前后细胞的形态学变化；RT-PCR、细胞免疫荧光检测男性生殖细胞相关标记的表达；将人脐带间充质干细胞移植于不育小鼠睾丸内,RT-PCR检测体内移植细胞的生殖细胞相关标记的表达。[结果]人脐带间充质干细胞具有多能干细胞的生物学特性,高表达多能干细胞标记CD44、CD29、CD59、OCT4;人脐带间充质干细胞在生殖细胞条件诱导液中诱导培养,诱导第7天形态上开始变细变长,形成类似“蝌蚪样”细胞,第3、7天表达生殖细胞标记Oct4、Ckit、CD49f、Stella,第14天表达生殖细胞特异标记Vasa;人脐带间充质干细胞移植至不育小鼠睾丸体内,1个月后表达生殖细胞标记Stella、Dazl。[结论]人脐带间充质干细胞具有多能干细胞特性,在体外一定条件下能向精原细胞诱导分化,不仅发生形态学的变化,表达生殖细胞的特异生物学特性,移植入不育小鼠体内后能存活,并能向精原细胞分化,表明人脐带间充质干细胞可作为干细胞移植治疗男性不育症的理想细胞供源。

全文目录

中文摘要  5-6
英文摘要  6-7
主要缩略语中英文对照表  7-8
前言  8-12
  参考文献  9-12
技术路线图  12-13
实验研究  13-35
  材料与方法  13-21
  结果  21-29
  讨论  29-32
  参考文献  32-35
附录1:主要混合液及培养基  35-36
发表文章  36-59
  专家述评  36-44
  论著  44-59
致谢  59-60
个人简历  60

人脐带华尔通氏胶源间充质干细胞向男性生殖细胞诱导分化的研究

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