学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

雷帕霉素诱导急性髓细胞白血病HL-60细胞自噬及UCH-L3的表达变化

作　者: 赵丹
导　师: 袁宏
学　校: 大连医科大学
专　业: 临床检验诊断学
关键词: 自噬泛素化 UCH-L3 雷帕霉素 HL-60细胞
分类号: R733.71
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 20次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

目的：泛素化和自噬介导的蛋白质降解过程是细胞自我调节的基本机制。二者不是相互独立的系统，而是通过复杂的机制存在相互调节的作用。泛素羧基末端水解酶L3（Ubiquitin Carboxyl-terminal Hydrolase L3，UCH-L3）是去泛素化酶家族的一员，近年来发现其异常表达常常与细胞的恶性转化和肿瘤的发生有关。本研究旨在观察雷帕霉素诱导的自噬对急性髓细胞白血病细胞株HL-60生长增殖的影响；比较分析雷帕霉素诱导HL-60细胞自噬发生前后UCH-L3在基因和蛋白水平上的表达差异，探讨UCH-L3在调控白血病细胞自噬性死亡中的作用机制，为白血病的治疗提供新的靶点和策略。方法：1. CCK-8法检测不同浓度（1μM、2μM、3μΜ、5μM）雷帕霉素诱导的自噬对HL-60细胞的生长抑制率。2.荧光显微镜观察雷帕霉素处理不同时间点（0h、12h、24h、48h）后，经吖啶橙染色的HL-60细胞形态变化。3.Real Time PCR方法检测雷帕霉素作用HL-60细胞不同时间点（0h、24h、48h）后，自噬标志性基因LC3-II与UCH-L3基因mRNA表达水平的变化。4. Western blot方法检测雷帕霉素作用HL-60细胞不同时间点（0h、24h、48h）后，UCH-L3蛋白表达水平的变化。结果：1.不同浓度的雷帕霉素对HL-60细胞增殖均有抑制作用，各组的抑制率与对照组相比，均有统计学意义（P<0.05），且呈剂量依赖关系。2.荧光显微镜下，对照组细胞内的荧光强度较低，随着处理时间的延长荧光强度也相应地增强，并逐渐出现细胞皱缩、碎裂等细胞死亡现象。3.2μM雷帕霉素处理细胞24h、48h后，与对照组比较，LC3-II mRNA表达量增加，而UCH-L3mRNA表达量下降，有统计学意义（P<0.05）。4.2μM雷帕霉素处理细胞24h、48h后，UCH-L3蛋白表达量下降，与对照组比较有统计学意义（P<0.05）。结论：1.雷帕霉素诱导的自噬对急性髓细胞白血病HL-60细胞生长增殖具有抑制作用，并可能诱导细胞发生自噬性死亡。2.雷帕霉素诱导HL-60细胞自噬发生后，UCH-L3在基因和蛋白水平上表达均下调，说明UCH-L3可能在调控白血病细胞自噬性死亡中发挥作用。

全文目录

摘要  7-9
ABSTRACT  9-11
前言  11-12
材料和方法  12-22
  1. 材料  12-16
    1.1 细胞培养材料及来源  12-13
    1.2 主要试剂及来源  13
    1.3 主要仪器及来源  13-14
    1.4 主要试剂配制  14-15
    1.5 相关引物和抗体  15-16
  2. 方法  16-21
    2.1 细胞培养  16
    2.2 CCK-8 法测定雷帕霉素诱导的自噬对 HL-60 细胞的生长抑制率  16
    2.3 荧光显微镜观察雷帕霉素处理不同时间后 HL-60 细胞形态变化  16
    2.4 Real Time PCR 法检测 LC3-II 和 UCH-L3 的 mRNA 表达水平  16-19
    2.5 Western blot 方法检测雷帕霉素处理后 UCH-L3 蛋白表达水平  19-21
  3. 统计学处理  21-22
结果  22-25
  1. 雷帕霉素对 HL-60 细胞增殖的影响  22-23
  2. 荧光显微镜观察经雷帕霉素处理后 HL-60 细胞的形态变化  23
  3. LC3-II 和 UCH-L3 mRNA 表达量变化  23-25
  4. 雷帕霉素处理不同时间点 UCH-L3 蛋白表达量变化  25
讨论  25-30
结论  30-31
参考文献  31-34
综述  34-46
  参考文献  41-46
致谢  46-47

雷帕霉素诱导急性髓细胞白血病HL-60细胞自噬及UCH-L3的表达变化

内容摘要

全文目录

相似论文