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黄芪多糖诱导树突状细胞成熟并促进特异性抗肿瘤免疫的实验研究

作　者: 荆雪宁
导　师: 武继彪
学　校: 山东中医药大学
专　业: 中西医结合基础
关键词: 黄芪多糖 树突状细胞 疫苗 抗肿瘤作用 抗原提呈 T细胞增殖 Th1/Th2亚群
分类号: R73-36
类　型: 博士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的：本研究主要分两部分。第一部分是黄芪多糖诱导的DC肿瘤疫苗体外抗肿瘤作用的实验研究，主要观察黄芪多糖诱导DC成熟及对DC免疫功能的影响；第二部分是黄芪多糖诱导的DC肿瘤疫苗对荷瘤小鼠免疫治疗效应的研究，主要观察黄芪多糖诱导的DC肿瘤疫苗对荷瘤小鼠的抗肿瘤效果，并探讨黄芪多糖诱导的DC肿瘤疫苗体内抗瘤的机制，为进一步开拓中药治疗肿瘤的途径提供实验和理论依据。方法：1.人外周血单个核细胞用IL-4、GM-CSF诱导分化为未成熟DC，加入黄芪多糖促进成熟，并设细胞因子组、黄芪多糖+细胞因子组，显微镜下连续观察形态变化，用FACS检测各组DC表型。2.成熟DC以肿瘤抗原致敏，与同种异体T细胞共培养，用MTT法检测T淋巴细胞增殖功能，用ELISA法检测共培养上清IL-12、IFN-γ水平。3.经DC激活的CTL细胞与肿瘤细胞共培养，用LDH释放法检测CTL对靶细胞特异性杀伤能力。4.小鼠骨髓来源的DC以黄芪多糖诱导成熟，负载S180肿瘤抗原，制备肿瘤疫苗。建立S180荷瘤小鼠模型，随机分成模型对照组、阳性对照组、黄芪多糖组和细胞因子组。给S180荷瘤小鼠进行免疫治疗，观察抑瘤率和小鼠生存时间。5.小鼠经眼眶采血，分离血清。ELISA法检测小鼠血清IL-12、TNF-α的水平。6.取小鼠脾脏，分离淋巴细胞，用MTT法检测小鼠脾脏淋巴细胞转化率，FACS检测小鼠Th1/Th2亚群。结果：1.黄芪多糖诱导的DC经形态学观察和表型鉴定，符合成熟DC的特征，黄芪多糖可以诱导DC成熟。2.黄芪多糖诱导的DC激活的CTL体外特异性杀伤肿瘤细胞的能力与TNF-α诱导的DC无显著性差异，提示黄芪多糖诱导的DC可以有效的激活CTL细胞，发挥特异性抗肿瘤作用。3.黄芪多糖诱导的DC能刺激同种异体T淋巴细胞增殖，并提高DC与T细胞共培养上清IL-12、IFN-γ的水平，提示黄芪多糖诱导的DC可以有效的给T细胞提呈抗原，提供活化信号，促进T细胞增殖，并分泌IFN-γ；同时，有效的抗原提呈也促使DC活化，分泌抗肿瘤细胞因子IL-12。4.黄芪多糖诱导的DC疫苗可减缓肿瘤生长速度，显著发挥体内抑瘤作用，延长荷瘤小鼠的生存时间。5.黄芪多糖诱导的DC疫苗能促进S180荷瘤小鼠分泌TNF-α、IL-12，通过抗肿瘤细胞因子途径发挥抗肿瘤作用。6.黄芪多糖诱导的DC疫苗可以显著提高小鼠脾脏淋巴细胞转化率，促使Th1/Th2向Th1转化，提示黄芪多糖诱导的DC疫苗可以增强机体免疫功能，通过调节Th1/Th2失衡状态向Th1方向转化，增强机体的细胞免疫功能。结论：黄芪多糖可以体外诱导DC成熟。经黄芪多糖诱导成熟的DC疫苗可有效的向T细胞提呈抗原，促进T细胞的增殖和活化，增加抗肿瘤细胞因子的分泌，激活CTL特异性抗肿瘤的能力，显示了良好的体外抗肿瘤效果。黄芪多糖诱导的DC疫苗可以通过增加荷瘤小鼠T细胞增殖能力、促进细胞因子TNF-α、IL-12的产生、诱导Th1/Th2向Th1转化等机制增强机体抗肿瘤免疫功能，减缓荷瘤小鼠瘤体生长速度，发挥延长生命作用。

全文目录


提要  3-5
Abstract  5-11
引言  11-13
第一部分 黄芪多糖诱导的 DC 肿瘤疫苗体外抗肿瘤作用的实验研究  13-27
  1 实验材料  13-15
    1.1 实验细胞系  13
    1.2 实验药品  13
    1.3 外周血  13
    1.4 主要试剂  13-14
    1.5 主要耗材  14
    1.6 主要仪器设备  14
    1.7 主要溶液配制  14-15
  2 实验方法  15-20
    2.1 实验分组  15
    2.2 人外周血来源的 DC 的体外诱导及培养  15-17
    2.3 DC 的形态学观察和表型鉴定  17
    2.4 负载 SGC-7901 肿瘤抗原的 DC 制备  17
    2.5 黄芪多糖对 DC 免疫功能的影响  17-19
    2.6 统计学方法  19-20
  3 实验结果  20-25
    3.1 DC 的形态学观察  20-21
    3.2 DC 的表型鉴定  21
    3.3 黄芪多糖诱导的 DC 疫苗对 T 细胞增殖的影响  21-22
    3.4 黄芪多糖对 DC 活化 T 细胞能力的影响  22-24
    3.5 黄芪多糖诱导的 DC 疫苗对 CTL 杀伤活性的影响  24-25
  4 小结  25-27
第二部分 黄芪多糖诱导的 DC 肿瘤疫苗对荷瘤小鼠免疫治疗效应的研究  27-41
  1 实验材料  27-28
    1.1 实验动物  27
    1.2 实验细胞系  27
    1.3 实验药品  27
    1.4 主要试剂  27
    1.5 主要实验仪器  27-28
  2 实验方法  28-33
    2.1 S180 荷瘤小鼠模型的建立  28-29
    2.2 实验分组  29
    2.3 小鼠骨髓来源的 DC 的体外诱导及培养  29-30
    2.4 负载 S180 肿瘤抗原的 DC 制备  30
    2.5 荷瘤小鼠的免疫治疗  30
    2.6 DC 疫苗对荷瘤小鼠的抑瘤作用和生命延长作用观察  30-31
    2.7 DC 疫苗对荷瘤小鼠血清 TNF-α和 IL-12 的影响  31
    2.8 DC 疫苗对荷瘤小鼠脾脏淋巴细胞转化和 Th1/Th2 亚群的影响  31-33
    2.9 统计学方法  33
  3 实验结果  33-40
    3.1 DC 形态学观察  33-34
    3.2 DC 疫苗对荷瘤小鼠的抑瘤作用和生命延长作用观察  34-35
    3.3 DC 疫苗免疫治疗后荷瘤小鼠血清 IL-12、TNF-α水平  35-38
    3.4 DC 疫苗免疫治疗对小鼠脾脏淋巴细胞转化功能的影响  38-39
    3.5 DC 疫苗免疫治疗对小鼠脾脏 Th1/Th2 亚群的影响  39-40
  4 小结  40-41
讨论  41-60
  1 中药有效成分的选择  41-46
    1.1 中药有效成分抗肿瘤的研究现状  41-45
    1.2 黄芪多糖抗肿瘤研究现状  45-46
  2 树突状细胞肿瘤疫苗的应用现状  46-52
    2.1 树突状细胞的生物学特性  46-47
    2.2 树突状细胞肿瘤疫苗的原理和制备  47-49
    2.3 DC 肿瘤疫苗的回输  49-50
    2.4 树突状疫苗的临床使用情况  50-52
  3 黄芪多糖对 DC 细胞的成熟及功能的影响  52-56
    3.1 黄芪多糖对 DC 的形态和表型的影响  52-54
    3.2 黄芪多糖对 DC 免疫学功能的影响  54-56
  4 黄芪多糖诱导的 DC 肿瘤疫苗对荷瘤小鼠的抑瘤作用及机制探讨  56-60
结语  60-62
参考文献  62-74
致谢  74-75
查新报告  75-84
论文著作  84-90
详细摘要  90-98

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 肿瘤学实验研究 > 治疗实验
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