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体外受精—胚胎移植过程中卵泡液血小板激活因子的研究

作　者: 白小双
导　师: 甄秀丽；张娜
学　校: 河北医科大学
专　业: 妇产科学
关键词: PAF 卵泡液体外受精-胚胎移植卵子质量优质胚胎胚胎植入临床妊娠
分类号:
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要

研究目的：通过体外受精-胚胎移植(In Vitro Fertilization embryoTransfer, IVF-ET)助孕的患者卵泡液中血小板激活因子(Platelet ActivatingFactor, PAF)水平及其与年龄、体重指数(Body mass index, BMI)、双侧卵巢窦卵泡数(Antral follicle count, AFC)、性激素及实验室参数的关系研究，以此来评价PAF在卵子发育、受精、胚胎发育中的作用及对妊娠结局的影响，为寻找一种能够客观、准确评价卵子质量及胚胎发育潜能的新方法提供理论依据。材料和方法：选择2013年7月1日~2013年8月31日于河北医科大学第四医院生殖中心首次接受IVF-ET（包括常规IVF和卵泡浆内单精子注射Intracytoplasmicsperm injection, ICSI）并在本周期移植患者共162例，作为研究对象，并排除女性既往患有结核、子宫内膜异位症及宫腔病变，近3个月未应用过激素类药物，既往无自然流产史，夫妻双方染色体正常，未发生卵巢过度刺激综合征（Ovarian hyperstimulation syndrome, OHSS）等。根据患者的情况选择标准长方案或微刺激方案进行控制性卵巢刺激。根据患者采集的精液情况选择常规IVF或ICSI方法授精。取卵后48h、72h观察胚胎发育情况。优质胚胎标准：取卵后72h胚胎细胞数≥7且≤12个，卵裂球大小均匀或略不均匀，碎片≤20%的胚胎为优质胚胎。为了研究卵泡液PAF水平与年龄、BMI、基础卵泡刺激素（Basalfollicle-Stimulating Hormone, bFSH）、基础卵泡刺激素/基础黄体生成素（Basal luteinizing hormone, bLH）、AFC、注射绒毛膜促性腺激素(Humanchorionic gonadotropin, HCG)日血清雌二醇(Estradiol, E2)和孕酮(Progesterone, P)、获卵数的关系，将162例患者以35岁为临界，分析年龄≤35岁和年龄＞35岁患者卵泡液中PAF水平的差异；以BMI=25kg/m2为临界，分析BMI＜25kg/m2和BMI≥25kg/m2患者卵泡液中PAF水平的差异；以bFSH=10IU/L为临界，分析bFSH≤10IU/L和bFSH＞10IU/L患者卵泡液中PAF水平的差异；以bFSH/bLH=2为临界，分析bFSH/bLH≤2和bFSH/bLH＞2患者卵泡液中PAF水平的差异；以AFC=7个为临界，分析AFC≤7个和AFC＞7个患者卵泡液中PAF水平的差异；以HCG日血清E2=1000pg/ml为临界，分析HCG日血清E2≤1000pg/ml和HCG日血清E2＞1000pg/ml患者卵泡液中PAF水平的差异；以HCG日血清P=2.6ng/ml为临界，分析HCG日血清P≤2.6ng/ml和HCG日血清P＞2.6ng/ml患者卵泡液中PAF水平的差异；以获卵数=4个为临界，分析获卵数≤4个和获卵数＞4个患者卵泡液中PAF水平的差异。为了进一步研究卵泡液中PAF水平对相同条件人群卵子质量及胚胎发育的影响，将同时满足非多囊卵巢综合症（Polycystic ovary syndrome,PCOS)、年龄≤35岁、BMI＜25kg/m2、AFC＞7个及应用标准长方案的68例移植患者，按卵泡液中PAF水平分为三组：①P AF≤5.9ng/ml组（17例），②5.9＜PAF＜11ng/ml组（34例），③P AF≥11ng/ml组（17例），在三组的年龄、不孕年限、BMI等基础情况及Gn天数、Gn用量、获卵数及移植日子宫内膜厚度等COS情况均处于同一水平的前提下比较三组患者受精率、双原核(Pronuclear,2PN)形成率、优胚率、植入率及妊娠率的差异。应用电化学发光法(Electro-Chemiluminescence Immuno assay, ECLIA)检测上述患者血清中的E2、P、LH、FSH及HCG水平；应用酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测患者取卵日第一个穿刺的成熟卵泡液的PAF水平。统计学处理：数据统计分析采用SPSS13.0版软件包，计量资料结果以均数±标准差(x±s)表示，比较采用t检验、方差分析、秩和检验、x2检验，相关性分析采用pearson及spearman相关分析。P＜0.05为差异有统计学意义。结果:1年龄＞35岁患者卵泡液中PAF水平明显低于年龄≤35岁患者（P＜0.05）。2BMI＜25kg/m2和BMI≥25kg/m2患者之间的卵泡液中PAF水平，无统计学差异（P＞0.05）。3bFSH≤10IU/L和bFSH＞10IU/L患者之间的卵泡液PAF水平无统计学差异（P＞0.05）。4bFSH/bLH≤2患者卵泡液中PAF水平高于bFSH/bLH＞2患者，但无统计学差异（P＞0.05）。5AFC≤7个和AFC＞7个患者卵泡液中PAF水平无统计学差异（P＞0.05）。6HCG日血清E2水平＞1000pg/ml患者卵泡液PAF水平高于HCG日血清E2≤1000pg/ml，但无统计学差异（P＞0.05）。7HCG日血清P≤2.6ng/ml和HCG日血清P＞2.6ng/ml患者卵泡液中PAF水平无统计学差异(P＞0.05)。8获卵数≤4个患者卵泡液中PAF水平低于获卵数＞4个患者，但无统计学差异(P＞0.05)。9卵泡液中PAF水平与年龄、BMI、bFSH、bFSH/bLH、AFC、HCG日血清E2和P水平、获卵数的相关性分析：卵泡液中PAF水平与年龄呈明显负相关（r=-0.197，P＜0.05）；PAF与BMI(r=0.006，P＞0.05)、bFSH(r=0.097，P＞0.05)、bFSH/bLH(r=0.039，P＞0.05)、AFC(r=0.098，P＞0.05)、HCG日血清E2水平(r=-0.101，P＞0.05)、HCG日血清P水平(r=0.066，P＞0.05)、获卵数(r=0.015，P＞0.05)无明显相关性，但发现HCG日血清E2以1000pg/ml为界，PAF与之有不同相关性，当HCG日血清E2≤1000pg/ml时，卵泡液中PAF水平与之呈明显正相关（r=0.567，P＜0.05）；而HCG日血清E2水平＞1000pg/ml时，卵泡液中PAF与之呈明显负相关（r=-0.242，P＜0.05）。10年龄、不孕年限、BMI等基础情况及应用促性腺激（Gonadotrophin,Gn)天数、Gn用量、获卵数及移植日子宫内膜厚度等COS情况均无统计学差异的68例移植患者按卵泡液中PAF水平分为PAF≤5.9ng/ml、5.9＜PAF＜11ng/ml和PAF≥11ng/ml三组。三组的受精率和植入率随着PAF水平的升高而升高，但无统计学差异（P＞0.05）。11三组的2PN形成率有统计学差异，PAF≥11ng/ml组患者的2PN形成率在三组中最高，为71.16%（P＜0.05），且明显高于PAF≤5.9ng/ml组的59.81%，两组比较有统计学差异（P＜0.05），而PAF≥11ng/ml组和5.9＜PAF＜11ng/ml组、PAF≤5.9ng/ml组和5.9＜PAF＜11ng/ml组比较无统计学差异（P＞0.05）。12三组的优胚率有统计学差异，PAF≥11ng/ml组患者的优胚率在三组中最高，为64.96%（P＜0.05），明显高于PAF≤5.9ng/ml组的46.09%，两组比较有统计学差异（P＜0.05），也明显高于5.9＜PAF＜11ng/ml组的50.63%，两组比较有统计学差异（P＜0.05），但PAF≤5.9ng/ml组和5.9＜PAF＜11ng/ml组比较无统计学差异（P＞0.05）。13三组的妊娠率有统计学差异，PAF≥11ng/ml组患者的妊娠率在三组中最高，为70.59%（P＜0.05），且明显高于PAF≤5.9ng/ml组的23.53%，两组比较有统计学差异（P＜0.05），而PAF≥11ng/ml组和5.9＜PAF＜11ng/ml组、PAF≤5.9ng/ml组和5.9＜PAF＜11ng/ml组比较无统计学差异（P＞0.05）。结论：PAF是可以促进卵子发育的细胞因子，卵泡液中PAF水平受年龄影响。卵巢功能正常的患者取卵日卵泡液PAF水平较高。HCG日血清不同的E2水平对卵泡液PAF水平有不同影响，PAF不仅可以促进颗粒细胞E2的分泌，E2过高会导致PAF水平的下降，在IVF助孕过程中，要适度控制COS程度，减少过高E2产生及获卵数的过多，从而改善IVF结局。取卵日卵泡液PAF水平可以作为预测妊娠结局的指标，也可以作为一种评价卵子质量及胚胎发育潜能的新方法。

体外受精—胚胎移植过程中卵泡液血小板激活因子的研究

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