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自噬在大鼠重症急性胰腺炎肠粘膜屏障中的表达及意义

作　者: 杨欢
导　师: 姚金锋
学　校: 河北医科大学
专　业: 内科学
关键词: 急性胰腺炎 肠粘膜屏障 自噬 核因子-κB 核因子抑制剂
分类号: R576
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要


重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）发病急、进展快、病情重、并发症多，是常见的消化系统疾病，不仅胰腺局部水肿、出血、坏死，往往还伴有其他脏器功能障碍，因此明确SAP的发病机制有重要意义。大量研究证实SAP时，肠道粘膜屏障损伤介导的生理病理改变在其发病过程中起到了非常关键的作用，是并发感染、形成腹腔积液、脓肿,诱发和加重全身炎症反应综合征(systemic inflammatory responsesyndrome,SIRS)、多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunctionsyndrome,MODS)，导致患者死亡的原因所在。自噬，被称为II型程序性死亡，是近年来备受关注的领域，已有多项研究证实自噬与很多疾病相关，但关于自噬在肠粘膜屏障中发挥的作用研究较少，已有研究发现肠粘膜屏障损伤中存在自噬表达，但机制及作用尚有待进一步探索，因此本研究通过建立重症急性胰腺炎模型，观察自噬在肠粘膜中的表达变化，并运用四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯(pyrrolidinedithiocarbamate,PDTC)，即核因子(NF)-κB抑制剂，探讨NF-κB信号通路对肠粘膜自噬的调节，探寻急性胰腺炎发生肠粘膜屏障损伤新的分子机制，为治疗SAP提供新的治疗策略。目的：观察自噬在左旋-精氨酸腹腔内注射所致重症急性胰腺炎大鼠肠粘膜中的表达及意义。方法:120只成年清洁级SD大鼠，平均体重为250±30g,随机分为正常对照组(N)组、重症急性胰腺炎模型(SAP)组和PDTC组，其中PDTC组根据剂量不同分为1mg/kg、10mg/kg、100mg/kg三组，分别记为P1、P10、P100。每个组又分为12h和24h两个时间点,共10组每组12只大鼠。实验前大鼠禁食12h，自由饮水，分两次腹腔注射20%左旋-精氨酸，每次均为2.5g/kg,间隔1h，诱导大鼠SAP模型；PDTC组在建立SAP模型前1h分别按1mg/kg、10mg/kg、100mg/kg进行腹腔注射；对照组腹腔注射等体积0.9%氯化钠。完成后分别在12h、24h处死大鼠，取血清、胰腺、小肠组织。HE染色后光学显微镜观察各组大鼠胰腺及小肠组织病理切片，Western blot法检测自噬相关基因LC3和Beclin1蛋白及NF-κB p65蛋白在小肠组织中的含量，肠道组织匀浆后测定超氧化物歧化酶(SOD)及丙二酫(MDA)含量，ELISA方法检测血清肠型脂肪酸结合蛋白(I-FABP)。结果：1胰腺组织病理学改变：对照组（N）：胰腺组织结构完整，腺泡小叶及腺体清晰可见，无出血及坏死，12h、24h两时间点无差别。模型组（SAP）：胰腺小叶间高度水肿,腺泡细胞空泡变严重,小叶内炎细胞广泛浸润,并看可见片状坏死和出血，24h比12h，以上情况更加多见。干预组（P1、P10、P100）：各组亦呈较明显的炎症变化,其中P100组最严重，可见弥漫性腺泡细胞坏死，部分腺泡呈孤岛状，P10组及P1组胰腺炎症明显减轻。2肠道组织病理学改变：对照组（N）：肠粘膜绒毛排列整齐,上皮细胞层完整,刷状缘光滑,未见明显炎症表现。组内两时间点无差别。模型组（SAP）:肠粘膜上皮细胞变性、坏死,部分脱落以至固有层裸露,绒毛变短、排列紊乱,固有层大量中性粒细胞浸润，毛细血管扩张、充血,24h比12h，粘膜破坏更明显。干预组（P1、P10、P100）：肠粘膜炎症损伤程度中P100组最严重，P1、P10组粘膜破坏程度减轻。3血清I-FABP：两时间点中SAP组I-FABP表达明显高于N组（P<0.05）；应用不同剂量PDTC干预后，与SAP组比较P1、P10组表达降低，但较对照组高（P<0.05），而P100组较SAP组无明显变化（P>0.05）；在12h，P1与P10组无差异，在24h结果中，P10组I-FABP表达低于P1组（P<0.05），SAP、P1两组24h较12h有明显升高（P<0.05）,其余三组不同时间点无差异（P>0.05）。4小肠组织匀浆Beclin1：与正常对照组比较，12h及24h SAP组Beclin1明显升高（P<0.05），给予PDTC预处理后，与SAP组比较，无论12h及24h，P1及P10表达均减低（P<0.05），而P100组在12h与SAP组比较无明显差异（P>0.05），在24h则高于SAP组；在两不同时间点，P1与P10均无差异（P>0.05）；各组24h与12h比较，除P100组24h较12h表达增高外（P<0.05），余四组无差异（P>0.05）。5小肠组织匀浆LC3：与正常对照组比较，SAP组LC3在12h及24h均明显升高（P<0.05），给予PDTC预处理后，无论12h及24h，P1及P10表达均较SAP组减低，而P100组LC3表达较SAP组明显升高（P<0.05），P1与P10在同时间点无显著差异（P>0.05）；各组24h与12h比较，除正常对照组外，SAP、P1、P10、P100组24h均较12h表达增高外（P<0.05）。6小肠组织匀浆p65：12h与24h结果趋势一致，均为SAP组较N组明显增高，予PDTC干预后，P1、P10两组结果较SAP组明显减低，但较对照组高（P<0.05），P100与SAP组相比无明显差异（P>0.05），其中P10组较P1组低（P<0.05）；五不同处理组24h与12h结果相比，SAP、P1、P100三组随时间增长蛋白表达增高（P<0.05），对照组及P10组两时间点无明显差异（P>0.05）。7小肠组织匀浆MDA：12h与24h两时间点均为SAP组最高，N组最低，PDTC干预使P1与P10组较SAP组降低，但仍较N组高（P<0.05），同时间点SAP组与P100组无统计学差异（P>0.05），P1与P10组在12h的结果无显著差异（P>0.05），在24h则P1较P10高；各组24h与12h比较，24hSAP组、P100组及P1均较12h增高（P<0.05），P1与N组则两时间点结果无差异（P>0.05）。8小肠组织匀浆SOD：在两时间点，SAP组均明显较对照组N低（P<0.05），干预后，在12h，P1组无明显升高，与SAP组无统计学差异(P>0.05),P100组较SAP低，P10组较SAP组高，但仍较N组低（P<0.05）；在24h，SAP、P100组SOD值较12h减低，P10组SOD值较12h升高，P1组则无明显变化(P>0.05)。结论：1腹腔注射L-精氨酸可以成功建立大鼠重症急性腺炎模型，造成胰腺损伤，同时形成肠道粘膜屏障损伤。2适量NF-κB抑制剂PDTC干预有助于促进急性胰腺炎及肠粘膜屏障功能恢复。3急性胰腺炎小肠组织中有自噬蛋白Beclin1和LC3表达，且表达水平与肠粘膜屏障损伤程度相关。4NF-κB信号通路可能参与肠粘膜自噬的调控，抑制NF-κB可抑制自噬形成。5氧自由基可能诱导自噬形成。

全文目录


摘要  4-8
ABSTRACT  8-13
前言  13-14
材料与方法  14-22
结果  22-24
附图  24-30
附表  30-36
讨论  36-39
结论  39-40
参考文献  40-43
综述  43-54
  参考文献  49-54
致谢  54-55
个人简历  55

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 消化系及腹部疾病 > 胰腺疾病
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