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荔枝核总黄酮对胆管阻塞型肝纤维化大鼠肝组织TLR2、TLR4表达的影响

作　者: 何志国
导　师: 赵永忠
学　校: 桂林医学院
专　业: 消化内科学
关键词: 荔枝核总黄酮 胆总管结扎 肝纤维化 Toll样受体2 Toll样受体4
分类号: R575.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的：探讨荔枝核总黄酮（total flavone of Litchi ChinensisSonn,TFL）对胆管阻塞型肝纤维化大鼠肝组织Toll样受体2(toll-likereceptor2,TLR2)、Toll样受体4（toll-like receptor4,TLR4）蛋白表达的影响及其抗肝纤维化可能的作用机制。方法：雄性SD大鼠80只，随机分为假手术组、胆总管结扎组、胆总管结扎+TFL小剂量（100mg·kg-1·d-1）组（以下简称TFL小剂量组）和胆总管结扎+TFL大剂量（200mg·kg-1·d-1）组（以下简称TFL大剂量组）。除假手术组外，其余各组均采用胆总管结扎法（common bile duct ligation,CBDL）制备肝纤维化大鼠模型。在造模后第二日开始，假手术组、胆总管结扎组给予生理盐水5ml/kg灌胃，TFL小剂量组、TFL大剂量组分别给予TFL100mg/kg、200mg/kg灌胃，均1次/天，共4周，第4周末处死全部大鼠，留取肝脏左叶组织。HE、Masson染色观察大鼠肝组织病理学改变；免疫组化法(immunohistochemistry，IHC)及免疫印迹法（Western blot，WB)检测TLR2、TLR4在四组大鼠肝组织内的表达。结果：Masson染色结果显示：假手术组、胆总管结扎组、TFL小剂量组、 TFL大剂量组的胶原面积（μm2）分别为：377.4±19.8、1172.5±108.4、1092.7±105.2、772.9±168.9；胆总管结扎组胶原纤维面积与假手术组比较差异显著（P<0.01），TFL大剂量治疗组胶原纤维面积与胆总管结扎组相比有显著性差异（P<0.01）,TFL小剂量治疗组胶原纤维面积与胆总管结扎组相比无差异。免疫组化染色提示：TLR2、TLR4主要表达于肝细胞、库普弗细胞、内皮细胞以及胆管上皮细胞等多种细胞的细胞质和细胞膜。假手术组肝组织内TLR2、TLR4蛋白呈阴性或弱阳性表达，胆总管结扎组肝组织中TLR2、TLR4的蛋白表达均明显高于假手术组，呈淡黄色、棕黄色或棕褐色染色，差异有统计学意义（P<0.01）。TFL小剂量组肝组织内TLR2、TLR4蛋白阳性表达低于胆总管结扎组，差异无统计学意义（P>0.05）。TFL大剂量组肝组织内TLR2、TLR4蛋白表达较胆总管结扎组明显降低，大部分以淡黄色染色为主，偶见棕黄色及棕褐色染色，差异有统计学意义（P<0.01）。假手术组、胆总管结扎组、TFL小剂量组、 TFL大剂量组的TLR2阳性细胞表达评分分别为：0.6±0.5、4.0±0.9、3.8±0.9、1.8±0.7；四组TLR4阳性细胞表达评分分别为：0.4±0.5、3.3±0.6、3.1±0.5、1.4±0.5；蛋白质印迹法检测假手术组、胆总管结扎组、TFL小剂量组、TFL大剂量组的TLR2蛋白表达结果分别为：0.4±0.0、0.7±0.1、0.7±0.0、0.5±0.0；WB法检测上述各组TLR4蛋白表达结果分别为：0.3±0.0、0.6±0.1、0.6±0.0、0.4±0.0；假手术组肝组织TLR2、TLR4蛋白有少量表达，胆总管结扎组肝组织中TLR2、TLR4的蛋白表达均明显高于TFL大剂量治疗组，差异有统计学意义（P<0.01），TFL小剂量治疗组肝组织内TLR2、TLR4蛋白阳性表达与模型组相比降低，但仍明显高于假手术组，差异有统计学意义（P<0.01）。结论：TLR2和TLR4蛋白表达增加可能与胆总管结扎大鼠肝纤维化的发生发展有关，大剂量TFL能抑制肝纤维化大鼠肝组织TLR2、TLR4的表达，并改善胆总管结扎大鼠肝组织纤维化程度。

全文目录


中文摘要  4-6
ABSTRACT  6-9
英汉缩略词对照表  9-10
前言  10-18
1 材料与方法  18-32
  1.1 实验材料与仪器  18-21
  1.2 主要试剂的配制  21-23
  1.3 荔枝核总黄酮的提取、分离与结构鉴定  23
  1.4 实验方法  23-32
2 结果  32-42
  2.1 一般情况  32-33
  2.2 各组大鼠肝组织病理学检测结果  33-37
  2.3 各组大鼠肝组织TLR2、TLR4免疫组化染色结果  37-40
  2.4 Western blot检测各组大鼠肝组织TLR2、TLR4表达  40-42
3 讨论  42-45
4 结论  45-46
参考文献  46-51
综述  51-62
  参考文献  59-62
攻读学位期间发表的学术论文目录  62-63
致谢  63

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 消化系及腹部疾病 > 肝及胆疾病 > 肝硬变
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