学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

霍乱弧菌LysR家族基因vc2324及其调控基因vc2323功能的研究

作　者: 裴彬
导　师: 朱军
学　校: 南京农业大学
专　业: 微生物学
关键词: 霍乱弧菌 定殖能力 胆盐 竞争黏附 多重抗药性
分类号: R378
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
下　载: 16次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


烈性传染病霍乱由革兰氏阴性细菌霍乱弧菌所引起,该细菌主要毒力基因CTXΦ和VPI(霍乱弧菌毒力岛)受AphB-ToxR级联调控系统调控,该系统中LysR家族基因aphB直接调控霍乱弧菌毒力基因的表达。LysR家族基因广泛存在于细菌各种属中,为原核生物中目前已知最大的转录因子家族,其调控的基因功能多样,涉及合成代谢、群体感应、毒力等众多方面。目前发现霍乱弧菌基因组中约有40个LysR型基因,其中大多尚未被研究。本文选取其中4个未被研究的LysR型基因分别构建其缺失突变株,通过比较突变株与野生株在定殖能力、毒力、生物膜形成能力等方面的差异,发现了一个参与霍乱弧菌定殖的LysR型基因vc2324。检测其相邻上游基因vc2323的转录情况,证实vc2324正调控vc2323的转录。宿主肠道竞争定殖实验发现vc2323缺失株定殖能力显著下降且较vc2324下降幅度更大。结合LysR家族基因经典调控模式,推测vc2323为影响霍乱弧菌定殖的功能基因。蛋白质同源性分析发现,假设蛋白VC2323与大肠杆菌中碲抗性蛋白TehA.流感嗜血杆菌HiTehA和拟南芥中SLAC1通道蛋白属于同源蛋白,推测该蛋白可能具有亚碲酸盐抗性、多重耐药性等多种功能。通过TcpA western blot和tcpA转录水平的检测,发现vc2323、vc2324均不影响霍乱弧菌毒力蛋白TCP的表达和形成。检测不同物质对vc2323表达的影响,并比较vc2323缺失株和野生株对KNO2、H2O2的敏感性差异,发现CO2/HCO3-不影响vc2323的表达,vc2323与霍乱弧菌NO/NO2抗性、活性氧抗性无明显关系。同时还发现vc2323、vc2324均不影响霍乱弧菌在LB培养基中生物膜的形成,也与霍乱弧菌对H+耐受力无关。体外竞争黏附实验发现：粗胆盐存在时,vc2323缺失株较野生株对小鼠小肠的黏附力明显下降,且随黏附时间的延长差异更加显著；而当无粗胆盐存在时,二者对肠道的黏附力无明显差异。且体外实验表明,野生株与vc2323缺失株对粗胆盐的敏感性相同。综合以上结果,分析vc2323对霍乱弧菌定殖能力的影响可能是因为在粗胆盐存在时其能够影响霍乱弧菌对宿主肠道的黏附能力,进而导致vc2323缺失株较野生株定殖能力显著下降,详细的分子机制尚待更深入的研究。同时,比较不同抗菌物质对缺失株与野生株最小杀菌浓度的差异,发现vc2323缺失株对氯霉素和萘啶酮酸的耐受性分别下降了约64%和74%,对亚碲酸钾的抗性下降了约33%,表明vc2323还参与霍乱弧菌的抗药性和亚碲酸盐抗性。综上所述,本研究发现LysR家族基因vc2324及其靶基因vc2323参与霍乱弧菌的定殖和抗药性及一定的亚碲酸盐抗性,为霍乱的防控提拱了更多的参考。

全文目录


摘要  6-8
ABSTRACT  8-10
文中所用縮略语  10-11
文献综述  11-25
  一、霍乱弧菌的致病元件  13-16
    1.1 CTXΦ噬菌体编码霍乱毒素CT  13-14
    1.2 霍乱弧菌毒力岛VPI与毒素共调节菌毛TCP  14-15
    1.3 CTXΦ与VPI毒力岛的表达调控  15-16
  二、LysR家族转录因子  16-19
    2.1 LysR家族转录因子的典型结构  16-17
    2.2 LTTR调控方式及经典调控模型  17-18
    2.3 霍乱弧菌中的LysR家族蛋白  18-19
  三、大肠杆菌碲抗性蛋白TehA与小分子物质对V.cholerae定殖的影响  19-21
  参考文献  21-25
第一章 霍乱弧菌LysR家族蛋白缺失菌株的构建和功能初筛  25-43
  1.1 实验材料  25-28
  1.2 实验方法  28-36
  1.3 结果和分析  36-40
  1.4 小结与讨论  40-41
  参考文献  41-43
第二章 vc2324对霍乱弧菌定殖能力的影响是依靠其对vc2323转录的调控  43-53
  2.1 实验材料  43-45
  2.2 实验方法  45-47
  2.3 结果和分析  47-49
  2.4 小结与讨论  49-51
  参考文献  51-53
第三章 vc2323影响霍乱弧菌定殖的机制  53-69
  3.1 实验材料  54-55
  3.2 实验方法  55-57
  3.3 结果和分析  57-67
  3.4 小结与讨论  67-68
  参考文献  68-69
第四章 vc2323抗药性的研究  69-73
  4.1 材料与方法  69-70
  4.2 结果与分析  70-71
  4.3 小结与讨论  71-72
  参考文献  72-73
全文总结  73-75
附录  75-77
致谢  77-78

相似论文

  1. 霍乱弧菌调控aphB的基因筛选及功能研究及铜绿假单胞菌对霍乱弧菌抑制作用研究,R378
  2. 霍乱弧菌LysR/MFS调控体系的功能研究,R378
  3. 霍乱弧菌LysR家族基因vc2103的功能及其调控基因的研究,R346
  4. 霍乱弧菌毒力基因tcpP调控基因的筛选及LysR蛋白功能的研究,R378
  5. 霍乱弧菌群体感应调控因子VqmA活性相关基因的筛选及LysR和MFS蛋白功能的研究,R378
  6. 六甲蜜胺口服脂质体的研究,R94
  7. 冬凌草甲素胆盐/磷脂混合纳米胶束的制备及其性质研究,R283
  8. 解淀粉芽孢杆菌对山茶灰斑病生物防治的研究,S436.8
  9. 致病性霍乱弧菌特异性基因序列三重TaqMan实时定量PCR快速检测体系的建立,R450
  10. 沙门氏菌、副溶血弧菌和霍乱弧菌同时检测方法的研究,TS254.7
  11. 苹果褐斑病的生物防治技术研究,S436.611
  12. 具有益生特性发酵乳杆菌的筛选及其在豆乳中的发酵特性研究,TS214.2
  13. 内蒙古酸粥中乳酸菌生物学特性及功能性研究,TS201.3
  14. 霍乱弧菌tcpA基因的克隆表达及其免疫保护作用研究,S852.5
  15. 法尼醇X受体激动剂对雌激素诱导的肝内胆汁淤积孕鼠胆汁酸代谢的影响及其分子机制,R714.255
  16. 炭疽芽孢杆菌和霍乱弧菌实时定量PCR快速检测体系的建立及评价,R450
  17. 番茄灰霉菌及其拮抗菌木霉的抗药性研究,S436.412
  18. 伊敏河和海拉尔河两岸牧区乳及乳制品中益生乳酸菌的分离鉴定及其体外筛选,TS252
  19. 内蒙古传统酸马奶酒中乳杆菌潜在益生特性的研究,TS252
  20. 熊脱氧胆酸对乙炔雌二醇诱发的肝内胆汁淤积症孕鼠肝脏BSEP及FXR表达的影响,R714.25
  21. 胎盘MDR3的表达及其与ICP关系的研究,R714.25

中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学） > 病原细菌
© 2012 www.xueweilunwen.com