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小鼠CX3CR1基因慢病毒过表达载体的构建及鉴定

作　者: 刘芳
导　师: 李法琦
学　校: 重庆医科大学
专　业: 老年医学
关键词: CX3CR1 趋化因子 慢病毒载体
分类号:
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的：构建小鼠CX3CR1基因的慢病毒过表达载体。方法：采用Oligo核酸软件对Genbank上发表的小鼠cx3cr1mRNA序列进行分析，设计一对分别含有Age I、BamH I酶切位点的CX3CR1基因上下游引物，PCR扩增出该基因的全序列cDNA，将其定向克隆入pUbi-MSC-EGFP多克隆位点，构建pUbi-MSC-CX3CR1-EGFP慢病毒表达载体。再通过氨苄青霉素抗性筛选、阳性转化子PCR鉴定，选取正确的克隆进行测序鉴定。重组慢病毒载体构建成功后,应用慢病毒包装质粒pHelper1.0,pHelper2.0及Lipofectamine2000共转染293T细胞获得病毒液，通过RT-PCR检测细胞中EGFP表达水平变化并计算病毒滴度。结果：PCR及测序结果表明目的基因序列克隆正确，成功构建了含有小鼠CX3CR1基因的重组表达载体，并包装成为慢病毒，获得滴度为2×10~8TU/ml的病毒液。结论：本课题成功构建慢病毒过表达载体pUbi-MSC-CX3CR1-EGFP，及滴度为2×108TU/ml的LV-CX3CR1-EGFP慢病毒液。为下一步研究慢病毒介导的CX3CR1基因转染骨髓间充质干细胞及其归巢能力的作用奠定基础。

全文目录


英汉缩略语名词对照  5-6
摘要  6-7
ABSTRACT  7-9
前言  9
1 材料与方法  9-20
2 结果  20-23
3 讨论  23-25
参考文献  25-27
文献综述  27-41
  参考文献  34-41
致谢  41-42
攻读学位期间发表的学术论文  42-43

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