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三七、栀子有效组分及其配伍对APP/PS1小鼠行为学的作用

作　者: 王峰
导　师: 华茜
学　校: 北京中医药大学
专　业: 中西医结合基础
关键词: 阿尔茨海默病三七总皂苷栀子苷 Morris水迷宫避暗试验八臂迷宫
分类号: R277.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要

1.目的三七和栀子组成的解毒通络方药是治疗缺血性中风的经典方,在临床应用中,发现对中风患者的认知功能有提高作用。基于此,课题组开展了三七、栀子有效组分防治阿尔茨海默症(AD)的作用及其机制的研究,结果显示二者配伍对于AD模型动物具有神经和血管保护作用,能够提高海马区神经元数目,增加突触囊泡上突触素的表达,改善神经可塑性。本研究以APP/PS1转基因小鼠为研究对象,采取三种典型的行为学测试方法,检测药物干预对APP/PS1转基因小鼠行为学变化的影响,探索三七、扼子有效组分及其配伍对其行为学的干预作用,为临床应用提供科学的依据。2.材料与方法实验选择雄性APP/PS1双转基因小鼠为研究对象,用药前进行基因检测,以确保实验对象的基因型,将其随机分为栀子组、三七组、配伍组、转基因模型组、野生型组,使用高纯度三七总皂苷和栀子苷,从小鼠四月龄开始,采用自主进食的方式,给药三个月,用药期间记录观察小鼠的体重等身体情况变化,了解药物对小鼠的影响。在小鼠七月龄时进行Morris水迷宫,八臂迷宫和避暗实验三种行为学测试。检验7月龄APP/PS1小鼠在此三项行为学测试中的表现,分析三七、栀子有效组分及其配伍对该品系小鼠行为学的改变作用,为栀子和三七配伍治疗AD的药效学机制假说提供行为学实验支持。3.结果3.1三七、栀子有效组分及其配伍对APP/PS1小鼠的毒副作用观察小鼠在进入动物房后,适应情况良好,各组小鼠体重每周均呈小幅增长状态。用药后一周内,小鼠体重出现轻微下降趋势,之后体重稳步增加。野生型组小鼠与模型组小鼠比较,体重增长较小,二者在用药后期出现显著性差异。各用药组之间比较没有显著性差异。3.2基因型鉴定我们对所有实验动物的基因型进行鉴定,所有转基因小鼠在350bp检测到APPswe基因扩增片段,在608bp处检测到PSEN1基因扩增片段,所有野生型组小鼠表现为阴性。说明小鼠基因型符合实验的要求。3.3三七、栀子有效组分及其配伍对APP/PS1小鼠行为学的作用3.3.1Morris水迷宫试验结果：5天获得性训练过程,评价小鼠从入水点到水下目标平台的时间,分析时取四个象限的平均值作为小鼠到达平台的潜伏期,采用Two-way ANOVA分析,显示时间与处理因素无显著交互作用,即不同的时间点,处理因素的作用效果相同；有显著组效应,即相同的时间点,不同处理因素之间有显著性差异；有显著的时间效应,表现为随着训练天数增加,各组找到平台的时间显著减少。LSD法两两比较显示,野生型组vs转基因模型组day1:P<0.05; day2:P<0.001; day3:P<0.01; day4:P<0.001; day5:P<0.001.栀子组vs转基因模型组day4:P<0.05; day5:P<0.01；三七组vs转基因模型组day2:P<0.05, day4:P<0.01;配伍组vs转基因模型组：day4:P<0.05, day5:P<0.05.3.3.2避暗实验,包括用药前实验和用药后实验,以测试过程中的小鼠进入暗箱的潜伏期和进入暗箱的次数(错误次数)作为衡量小鼠学习记忆能力的指标。均采用One-way ANOVA分析：检测结果显示,用药前后两次实验,测试阶段无论是避暗潜伏期还是错误次数均没有显著性差异(P>0.05)。3.3-八臂迷宫实验结果,训练过程,随着训练天数增加,各组小鼠工作记忆错误次数显著减少,训练第2、3、4、5、6、8天,各用药组小鼠、野生型组小鼠与转基因模型组相比,工作记忆错误次数较小,不同程度的表现出显著性差异(P<0.05或P<0.01)；参照记忆错误次数,结果显示随着训练天数的增加,各组小鼠参照记忆错误次数变化不明显;总错误次数,随着训练天数增加,各组小鼠总错误次数不断减小,第2、3、4、5、6、8天,各用药组小鼠、野生型组小鼠与转基因模型组小鼠相比,总错误次数较小,不同程度表现出显著性差异(P<0.05或P<0.01)；,随着训练天数增加,各组走完放有食物臂的总时间显著减小,训练十天之内,各用药组、野生型组小鼠与转基因模型组小鼠相比,走完放有食物臂的总时间较少,不同程度的表现出显著性差异(P<0.05或P<0.01)。测试过程,各组小鼠在未放食物臂中停留时间比例,各用药组、野生型组停留时间较少,与转基因模型组小鼠比较：栀子组vs转基因模型组P<0.01,三七组vs转基因模型组0.0547,配伍组vs转基因模型P<0.05,野生型组vs转基因模型组P=0.0932。4.结论4.1Morris水迷宫实验说明7月龄转基因模型组小鼠已经出现学习记忆能力的下降,药物均可有效的改善APP/PS1转基因小鼠的空间学习和记忆.能力。4.2避暗实验测试,无论是用药前还是用药后,各组间避暗潜伏期和错误次数均无显著差异,推测避暗实验可能对7月龄之前的APP/PS1小鼠的检测敏感度不够,或许通过进一步的实验方法改进可以将不同组小鼠之间存在的差异检测出来。4.3八臂迷宫实验结果,训练过程中,转基因小鼠的短期学习和记忆能力较差,药物体现出改善小鼠学习记忆能力的效果；各组小鼠之间的长期记忆并没有体现出差异；测试过程,转基因模型组小鼠停留在未放食物臂中的时间明显高于其他各组小鼠,说明转基因模型小鼠的学习记忆能力存在缺陷,药物改善学习记忆的效果得到体现。4.4由行为学实验测试结果,我们可以得到以下结论：7月龄APP/PS1小鼠在水迷宫、八臂迷宫已经出现学习和记忆能力的损伤;栀子、三七有效组分对APP/PS1小鼠的学习和记忆能力具有明显的改善作用;基于八臂迷宫检测的特点,其对APP/PS1小鼠学习记忆能力的检测敏感度最佳。

全文目录

中文摘要  6-9
Abstract  9-13
英文缩略语  13-14
上篇文献综述  14-28
  综述一阿尔茨海默症的流行病学及典型病理变化  14-19
    1. AD的流行病学研究  14-15
    2. AD的病理特征及典型临床表现  15-17
      Aβ 毒性学说  15-16
      tau 学说  16
      基因突变学说  16-17
    3. AD的诊断  17-19
  综述二中医药治疗AD的理论和应用  19-23
    1. 阿尔兹海默病中医药治疗方案  19-20
    2. 三七治疗AD的研究  20-21
    3. 栀子治疗AD的研究  21-22
    4. 三七、栀子配伍治疗AD的应用  22-23
  综述三阿尔茨海默症小鼠模型及其行为学检测方法  23-28
    1. 老年性痴呆动物模型  23-24
    2. 痴呆动物模型的行为学检测方法  24-28
      2.1 Morris水迷宫(Morris Water Maze)  25-26
      2.2 放射臂迷宫(Racial Arm Maze)  26
      2.3 避暗实验  26-28
下篇实验部分  28-57
  实验一三七、栀子有效组分及其配伍对APP/PS1小鼠的毒副作用观察  30-33
    1. 实验动物和分组  30
    2. 主要试剂  30
    3. 实验动物饲养  30-31
    4. 给药  31
    5. 指标观察  31-32
    6. 结果与讨论  32-33
  实验二基因型检测  33-35
    1. 仪器与试剂  33
    2. 实验步骤  33-34
    3. 实验结果  34-35
  实验三三七、栀子有效组分及其配伍对APP/PS1小鼠行为学的作用  35-57
    1. Morris水迷宫试验  35-40
      1.1 实验设备  35
      1.2 实验过程  35-36
      1.3 实验结果  36-39
        1.3.1 获得性训练  36-37
        1.3.2 Morris水迷宫测试  37-39
      1.4 结论与讨论  39-40
    2. 避暗实验  40-45
      2.1 实验设备  40
      2.2 实验过程  40
      2.3 实验结果  40-44
        2.3.1 用药前避暗潜伏期  40-41
        2.3.2 用药前错误次数  41-42
        2.3.3 用药后避暗潜伏期  42-43
        2.3.4 用药后错误次数  43-44
      2.4 结论与讨论  44-45
    3. 八臂迷宫  45-54
      3.1 实验设备  45
      3.2 实验过程  45
      3.3 实验结果  45-53
        3.3.1 训练  45-52
        3.3.2 测试结果  52-53
      3.4 结论与讨论  53-54
    4. 三种行为学检测方法及药物作用评价  54-57
结语  57-60
参考文献  60-66
致谢  66-68
个人简历  68

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