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武汉地区流感样病例中人鼻病毒和人肠道病毒的分子流行病学研究

作　者: 张玉
导　师: 缪小平
学　校: 华中科技大学
专　业: 公共卫生
关键词: 人鼻病毒（HRV）人肠道病毒（HEV）系统进化树
分类号: R181.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：应用实时荧光定量PCR及RT-PCR法对武汉地区类流感样监测病例的咽拭子标本进行人鼻病毒(human rhinovirus, HRV)和人肠道病毒(human Enterovirus,HEV)的检测和分型，了解人鼻病毒/人肠道病毒（HRV/HEV）在武汉地区的感染现状、亚型构成、分子进化，以及年龄、季节分布等流行情况，揭示和阐明人鼻病毒、人肠道病毒的流行特点及规律，为人鼻病毒、人肠道病毒等相关呼吸道感染的防控、临床诊断与治疗、疫苗的研发提供理论依据。研究对象及方法：1.收集武汉地区2007年7月至2011年12月期间，武汉市一医院和武汉市儿童医院门诊流感样病例（体温≥38℃，同时伴有咳速或咽痛之一者）的咽拭子标本共计4065份。2.收集咽拭子标本后低温运送至武汉市疾病预防控制中心病毒科。咽拭子标本经核酸提取后，采用HRV、HEV通用引物及探针和实时荧光定量PCR法检测HRV/HEV；同时每份标本采用PCR及RT-PCR法检测A型和B型副流感病毒（IFV(A和B型)）、人偏肺病毒（HMPV）、呼吸道合胞病毒（RSV）、偏肺病毒（PIV(1、2、3)）、冠状病毒（HCoV(HKU1和NL63型)）、腺病毒（AdV）及人博卡病毒（HboV）。随机选取50例HRV/HEV检测阳性样本，应用HRV、HEV分型引物，对VP4/VP2区段进行RT-PCR扩增，并对扩增产物进行测序，所得测序结果与美国国立生物技术中心(NCBI) Genebank中的序列进行BLAST比较分析。利用MEGA5.1软件中的邻接法进行系统进化分析。结果：在4065份流感样病例的咽拭子标本中共检出HRV/HEV阳性标本170例，总检出率为4.18%，其中23例阳性标本存在与其它呼吸道病毒的混合感染(23/170,13.5%)。在混合感染病例中，33.3%(8/24)的病例混合感染腺病毒(AdV)，20.8%(5/24)的病例混合感染冠状病毒(HCoV),16.7%(4/24)的病例混合感染副流感病毒(PIV),8.3%(2/24)的病例混合感染人偏肺病毒(HMPV)，8.3%(2/24)的病例混合感染博卡病毒(HBoV)，4.2%(1/24)的病例混合感染甲型H1N1流感病毒，4.2%(1/24)的病例混合感染乙型流感病毒。各年龄组HRV/HEV感染者中，0-3岁、4-14岁、15-25岁、26-65岁及>65岁年龄组的检出率分别为7.0%（117/1662）、4.5%（43/948）、0.5%（5/930）、1.1%（5/477）和0.0%（0/48），3岁以下（包括3岁）儿童阳性率明显高于3岁以上年龄组(χ2=57.300，P=0.000)。2008年7月-2011年12月检测结果显示，HRV/HEV在武汉地区流行呈现明显的季节性，以春夏两季为高发季节。50例HRV/HEV通用引物检测阳性的标本中34例分型成功。其中，9例为HRV单独感染，23例为HEV单独感染，2例为HRV和HEV混合感染。11例HRV感染者中6例为HRV-A(54.5%)，2例为HRV-B(18.2%)，3例为HRV-C(27.3%)；25例HEV感染者中10例为HEV-A(40%)，15例为HEV-B(60%)。系统进化分析发现，武汉地区流行的HRV、HEV与其对应的参考株在进化上十分接近，但武汉流行株也表现出了基因变异和遗传分化的迹象。结论：HRV/HEV的检出率较高，是引起武汉地区人群急性呼吸道感染的一个重要病因。不同年龄组HRV/HEV感染率不同，其中3岁及3岁以下儿童为易感人群。武汉地区HRV/HEV的流行呈现明显的季节性，以春夏两季为高发季节。武汉地区HRV感染与HEV感染均呈现基因多样性，其中HRV-A、HEV-B分别为HRV感染和HEV感染最主要的基因型。

全文目录

目录  4-5
论文缩写词汇中英文对照表  5-6
中文摘要  6-8
Abstract  8-10
前言  10-13
材料与方法  13-22
结果  22-32
讨论  32-39
结论  39-40
参考文献  40-47
综述  47-62
  参考文献  55-62
致谢  62

武汉地区流感样病例中人鼻病毒和人肠道病毒的分子流行病学研究

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