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玉屏风多糖对佐剂性关节炎大鼠T细胞亚群的影响

作　者: 陈莹瑛
导　师: 李俊
学　校: 安徽医科大学
专　业: 药理学
关键词: 玉屏风多糖 佐剂性关节炎 T细胞亚群 细胞因子
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis, RA)是一个累及周围关节为主的多系统性炎症的自身免疫病,临床上具有渐进性或反复发作的特点,目前尚无特效治疗,主要表现为对称性、慢性、进行性多关节炎。近来研究表明,RA的发生发展与多种免疫细胞及其分泌的细胞因子有关,其中T细胞介导的免疫反应异常是类风湿关节炎的主要发病机制,尤其是CD4+T细胞在类风湿关节炎发病机制中起着重要作用,参与类风湿关节炎的激发和延续。RA患者的血清及滑膜液中Th1/Th2细胞分泌的细胞因子水平存在着明显失衡,Th1/Th2细胞失衡与RA发生和转归有直接关系。Th1细胞主要功能是参与细胞免疫。在RA过程中,受到刺激后Th1细胞分泌炎症细胞因子白介素2(Interleukin-2,IL-2)、干扰素y(Interferon-y, IFN-y)等,IFN-γ能活化巨噬细胞,增强MHC-Ⅱ类抗原的表达,增强NK活性,抑制成纤维细胞产生胶原,刺激并增强炎症反应。Th2细胞主要产生IL-4、IL-10等,IL-4能减少IL-1和TNF-α的分泌,抑制关节软骨的腐蚀破坏。血中Th1细胞有使RA患者病情慢性化的作用,而Th2细胞则主要起保护性作用。因此积极开展有针对性的免疫调节治疗,恢复免疫细胞的平衡,抑制某些炎症介质的活性、调控相关细胞因子的表达可能是控制RA慢性炎症的一条新途径。本实验提取玉屏风多糖(Yupingfeng Polysaccharide, YPF-P),以弗氏完全佐剂(Freund’s Complete Adjuvant, FCA)诱导的佐剂性关节炎(Adjuvant-induced arthritis,AA)大鼠模型为研究对象,探讨YPF-P对佐剂性关节炎大鼠T细胞亚群及相关细胞因子的影响。具体研究内容包括一下几个部分：1. YPF-P的提取玉屏风药材(黄芪：白术：防风三种组分按照重量配比为3：1：1)6.0 kg,用75℃热水煮提2次,每次2小时。提取药液浓缩至20-30L,醇沉,离心后干燥获得玉屏风多糖粗提物。多糖粗提物用乙酸乙酯脱脂,再用sevage法去蛋白,将干燥得到的棕色产物命名为玉屏风多糖(YPF-P)(得率为0.85%)。2.AA模型诱导及评价除正常组外均以弗氏完全佐剂(FCA)于每鼠左后足趾皮内注射0.1 ml FCA致炎,在致炎前和致炎后12、16、20、24、28天分别测定大鼠右侧足爪容积和多发关节炎指数(Arthritic Index, AI)。结果显示YPF-P (40、80、160mg·kg-1,ig)对AA大鼠继发性炎症(继发性足肿胀、多发性关节炎)均有明显的抑制作用。3. YPF-P对AA大鼠的免疫调节作用用MTT法检测刀豆蛋白(Concanavalin A, ConA)诱导的外周血淋巴细胞增殖反应。结果显示AA组大鼠对ConA诱导的淋巴细胞增殖反应均明显低于正常对照组,80及160 mg-kg-1 YPF-P给药可明显提高ConA诱导的淋巴细胞增殖反应。提示YPF-P对AA大鼠细胞免疫功能有调节作用。4. YPF-P对AA大鼠T细胞亚群的影响用流式细胞术(Flow cytometry, FCM)检测大鼠外周血中CD4+和CD8+T细胞的变化。结果表明,AA大鼠CD4+T细胞数明显增多,CD8+T细胞数轻度减少,经YPF-P治疗后,可明显减少CD4+细胞数,降低CD4+/CD8+的比值,说明YPF-P能使失调的T细胞亚群恢复平衡。5. YPF-P对AA大鼠T细胞分泌细胞因子的影响用ELISA法检测大鼠外周血中IFN-γ含量,放免法检测大鼠外周血中IL-4含量。发现80及160 mg-kg-1 YPF-P给药能明显降低IFN-γ的含量和轻度提高IL-4的含量。此外,用RT-PCR检测淋巴细胞IFN-γmRNA表达,半定量分析发现,各给药组能降低IFN-γmRNA的表达。提示YPF-P对紊乱的细胞因子网络有一定的调节作用。以上结果提示：YPF-P能减轻AA大鼠的继发性炎症,这一作用可能与上调AA大鼠低下的外周血淋巴细胞增殖反应,调节T淋巴细胞亚群及其相关细胞因子的平衡有关。

全文目录


英文缩略词表  5-6
中文摘要  6-9
英文摘要  9-12
实验一 玉屏风多糖的提取和含量测定  12-18
  1.前言  12
  2.实验材料  12-13
  3.实验方法与结果  13-16
  4.讨论  16-17
  参考文献  17-18
实验二 玉屏风多糖对佐剂性关节炎大鼠T细胞亚群的影响  18-43
  1 前言  18-19
  2 实验材料  19-22
  3 实验方法  22-30
  4 实验结果  30-36
  5 讨论  36-40
  参考文献  40-43
小结  43-44
附录  44-45
致谢  45-47
综述  47-61
  参考文献  57-61

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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