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两种渔药在沉积物中的微生物降解研究
作 者: 蒋丽娟
导 师: 尹大强
学 校: 南京大学
专 业: 环境科学
关键词: 渔药 孔雀石绿 呋喃唑酮 降解 固定化 安全性
分类号: X172
类 型: 博士论文
年 份: 2011年
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内容摘要
1、通过室内模拟试验,研究孔雀石绿在养殖水体沉积物中的降解行为,结果显示孔雀石绿降解半衰期在12.9天-50.34天之间。降解过程中产生无色孔雀石绿,且消除时间比孔雀石绿消除时间长。沉积物中孔雀石绿浓度和温度均对孔雀石绿降解有影响,浓度上升,降解速率降低;温度上升,降解速率加快。沉积物孔雀石绿降解中微生物降解作用明显,光降解作用影响不明显。呋喃唑酮在沉积物中降解迅速,半衰期为33.39h。呋喃唑酮降解中会产生代谢产物AOZ,且在沉积物中消除时间长。AOZ在沉积物中降解半衰期为22.5天。2、从受孔雀石绿污染的养殖水体底泥中驯化分离到MJl菌株能有效降解孔雀石绿,经鉴定为假单胞菌(Pseudomonas sp.),该菌对无色孔雀石绿也具有降解能力。菌株MJl对孔雀石绿的24h和72h降解率为83.3%和93.6%,降解过程中有少量无色孔雀石绿代谢产物的产生。对5mg/L无色孔雀石绿的24h和72h降解率为72.9%和84.4%,降解效果相交孔雀石绿要略差。孔雀石绿浓度在低于10mg/L时,菌株MJl对孔雀石绿降解率都超过90%。在30-35℃降解率最佳,均能超过90%;pH7.0-9.0范围比较适合菌株对MG降解,pH7.0为最佳降解PH值。HPLC-MS对代谢产物进行初步研究分析,得到九个产物,并推断可能存在的裂苯环降解途径。3、从多次使用过呋喃唑酮的鱼塘底泥中富集驯化分离筛选得到菌株F1和F5对AOZ的降解效果较好,72h降解率分别为85.6%和89.7%。通过生理生化特征及16SrDNA测序结果鉴定F1菌株为苍白杆菌(Ochrobacterum sp.),F5为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。菌株F1对5mg/L的AOZ在20-40℃降解率均大于90%,适应温度范围宽,而菌株F5的最适温度在30-35℃。菌株F1适合的pH范围是7.0-8.0,而F5则是6.0-8.0,F5适应pH范围更宽。4、固定菌制备的最佳条件为:CaC12浓度5%,海藻酸钠浓度2%,胶联时间16h、包菌量600mg/kg。菌株MJ1和M3固定化后降解能力均有提高,MJl降解能力优于M3。MJl固定化后适应pH能力增强。混合固定菌对不同浓度孔雀石绿的底泥均有降解,且对低浓度(<1.0μg/g干重)底泥降解效果更好。固定菌的加入使得孔雀石绿降解半衰期缩短,表明固定菌对孔雀石绿的降解是有效的。适当增加固定菌的投菌量可提高降解速率和降解率,但这不是无限的。自然光照对孔雀石绿有一定降解作用,固定菌和自然光照联合作用后可以大大提高降解率,其中对降解起主要作用的是固定菌。5、大型溞急性毒性试验表明菌株MJ1和M3对大型溞的LC50均大于500mg/L。斑马鱼急性毒性试验表明两株菌对斑马鱼的LC50均大于500mg/L。1000mg/L高剂量组下,两株菌对鲫鱼抗氧化防御系统酶活未出现影响。表明两株菌具有相当的安全性。
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全文目录
摘要 9-11 Abstract 11-13 本论文特色与创新之处 13-14 第一章 绪论 14-45 1. 渔业水域药物使用和污染现状 14-21 1.1 渔药的主要类别和特点 14-16 1.2 渔药的使用现状 16-17 1.3 渔药对环境和健康的影响 17-21 1.3.1 药物残留 17-18 1.3.2 抗药性 18-19 1.3.3 生态风险 19-21 2. 孔雀石绿相关研究进展 21-29 2.1 孔雀石绿概述 21-22 2.2 孔雀石绿的毒理学危害 22-24 2.2.1 孔雀石绿对水生动物的毒性 22-23 2.2.2 孔雀石绿对哺乳动物的毒性 23-24 2.3 孔雀石绿降解研究进展 24-29 2.3.1 物理法 25 2.3.2 化学法 25-26 2.3.3 生物法 26-29 3. 呋喃唑酮相关研究进展 29-32 3.1 硝基呋喃类药物概述 29-31 3.2 硝基呋喃类药物的毒理学危害 31 3.3 硝基呋喃类药物的降解和代谢 31-32 4. 微生物固定化的研究 32-35 4.1 固定化的方法和载体的选择 33-34 4.1.1 包埋法 33 4.1.2 吸附法 33 4.1.3 交联法 33-34 4.2 固定化微生物技术在水产养殖中的应用 34-35 5. 本论文的研究目的、重点和意义 35 参考文献 35-45 第二章 两种渔药在养殖水体沉积物中降解行为的研究 45-60 第一节 孔雀石绿在养殖水体沉积物中的降解行为 45-53 1. 材料和方法 45-47 1.1 仪器与试剂 45-46 1.2 供试底泥 46 1.3 孔雀石绿和无色孔雀石绿的HPLC测定 46 1.4 沉积物理化性质的测定 46-47 1.5 沉积物中孔雀石绿降解试验方法 47 2. 结果和讨论 47-53 2.1 沉积物理化指标 47 2.2 沉积物中孔雀石绿的降解 47-49 2.3 不同孔雀石绿含量沉积物的降解 49-50 2.4 温度对沉积物中孔雀石绿降解的影响 50-52 2.5 沉积物中孔雀石绿微生物降解、光降解和其他非生物降解 52-53 第二节 呋喃唑酮在养殖水体沉积物中的降解行为 53-58 1. 材料和方法 53-55 1.1 仪器与试剂 53 1.2 供试底泥 53 1.3 呋喃唑酮浓度的HPLC测定 53-54 1.4 呋喃唑酮代谢产物AOZ的HPLC/MS测定 54 1.5 沉积物中呋喃唑酮降解试验方法 54-55 2. 结果和讨论 55-58 2.1 呋喃唑酮的HPLC测定 55-56 2.1.1 呋喃唑酮标准曲线方程和线性范围的确定 55 2.1.2 呋喃唑酮的回收率 55-56 2.2 沉积物中呋喃唑酮的降解 56-58 本章小结 58 参考文献 58-60 第三章 孔雀石绿降解菌MJ1的分离鉴定和降解特性研究 60-75 1. 材料和方法 60-64 1.1 样品采集 60 1.2 培养基与试剂 60-61 1.3 仪器 61 1.4 分析方法 61-62 1.5 孔雀石绿降解菌株的分离、筛选和鉴定 62-63 1.5.1 降解菌的富集、驯化和筛选 62 1.5.2 菌株鉴定 62-63 1.5.2.1 菌落菌体形态观察和生理生化鉴定 62 1.5.2.2 菌株的16SrDNA的序列测定与系统发育分析 62-63 1.6 孔雀石绿降解特性试验 63-64 2. 结果和讨论 64-73 2.1 菌株分离和生理生化特征 64 2.2 菌株16SrRNA基因序列分析 64-65 2.3 菌株MJ1的降解能力 65-66 2.4 降解性能优化 66-72 2.4.1 初始浓度对降解的影响 66-67 2.4.2 温度对降解的影响 67-68 2.4.3 pH对降解的影响 68-69 2.4.4 碳源(葡萄糖)对降解的影响 69-70 2.4.5 酵母膏对降解的影响 70-72 2.5 降解产物初步研究 72-73 3. 本章小结 73-74 参考文献 74-75 第四章 AOZ降解菌的分离鉴定和降解特性研究 75-86 1. 材料和方法 75-77 1.1 样品采集 75 1.2 培养基与试剂 75-76 1.3 仪器 76 1.4 分析方法 76 1.5 降解菌株的分离、筛选和鉴定 76-77 1.5.1 菌株筛选 76-77 1.5.2 菌株鉴定 77 2. 结果和讨论 77-84 2.1 降解菌株的筛选 77-78 2.2 降解菌株F1的鉴定 78-80 2.3 降解菌株F5的鉴定 80-82 2.5 降解特性研究 82-84 3. 本章小结 84 参考文献 84-86 第五章 固定化微生物对底泥中孔雀石绿的降解 86-99 1. 材料与方法 86-89 1.1 仪器与试剂 86-87 1.2 试验材料和培养基 87 1.3 孔雀石绿的HPLC分析 87 1.4 固定化微生物制备和特性研究 87-88 1.4.1 固定化微生物的制备 87-88 1.4.2 固定化条件的确定 88 1.4.3 固定化微生物的降解能力 88 1.5 底泥中孔雀石绿降解试验 88-89 2. 结果和讨论 89-96 2.1 固定化条件的确定 89-91 2.1.1 三因素正交试验 89-90 2.1.2 包菌量的确定 90-91 2.2 固定菌降解条件 91-93 2.2.1 固定菌对不同浓度孔雀石绿的降解能力 91 2.2.2 pH值对固定菌的降解能力的影响 91-92 2.2.3 温度对固定菌的降解能力的影响 92-93 2.3 固定菌对底泥中孔雀石绿的降解 93-96 2.3.1 固定菌对不同浓度孔雀石绿的底泥的降解 93-94 2.3.2 固定菌生物量对降解的影响 94-95 2.3.3 泥水比对降解的影响 95 2.3.4 光照和固定菌对底泥孔雀石绿的联合作用 95-96 本章小结 96-97 参考文献 97-99 第六章 降解菌的安全性初步研究 99-104 1. 材料与方法 99-101 1.1 试验对象 99 1.2 试验生物 99-100 1.2.1 大型溞(Daphnia magna) 99 1.2.2 斑马鱼(Brachydanio rerio) 99 1.2.3 鲫鱼(Carassius auratus) 99-100 1.3 试验方法 100-101 1.3.1 大型溞急性毒性试验 100 1.3.2 斑马鱼急性毒性试验 100 1.3.3 鲫鱼抗氧化酶防御系统酶活影响 100-101 2. 结果 101-102 2.1 大型溞急性毒性试验 101-102 2.2 斑马鱼急性毒性试验 102 2.3 鲫鱼抗氧化系统酶活情况 102 3. 本章小结 102 参考文献 102-104 总结 104-106 1. 结论 104-105 2. 展望 105-106 致谢 106-107 博士期间发表论文和获奖情况 107-108
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中图分类: > 环境科学、安全科学 > 环境科学基础理论 > 环境生物学 > 环境微生物学
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