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酶解法制备海参多肽及其抗氧化性能研究

作　者: 房堃
导　师: 金海珠
学　校: 烟台大学
专　业: 食品加工与安全
关键词: 海参多肽酶解自由基抗氧化性
分类号: TS254.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 35次
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内容摘要

海参营养丰富,含有多种对人有益的微量元素,具有很高的营养保健价值和商业价值,因此很多国家越来越重视对海参的深度研究和开发。随着理论研究的深入,人们对自由基的认识越来越广泛,抗氧化活性物质受到普遍关注,海参多肽具有较强的抗氧化活性且食用安全性高,因此极具开发潜力。本实验选取了木瓜蛋白酶、中性蛋白酶A.S.1398和复合胰蛋白酶三种酶在相同条件下对新鲜海参进行水解制备海参多肽,水解过程中每30min取一次样并对每个样品的清除羟自由基和超氧阴离子的活性进行测定,探究三种酶所得海参肽抗氧化活性随酶解时间的变化。结果表明,木瓜蛋白酶所得海参肽在第60min和120～150min之间出现了清除羟自由基的最高点,在120～150min之间出现了清除超氧阴离子的最高点；中性蛋白酶所得海参肽在60min和150min时出现了清除羟自由基的最高点,在第130min时出现了清除超氧阴离子的最高点；复合胰蛋白酶分别在第70min和第180min时出现了清除羟自由基的最高点。木瓜蛋白酶得到的海参肽清除超氧阴离子活性较高,清除率为25.10%；中性蛋白酶A.S.1398得到的海参肽清除羟自由基活性较高,为77.00%。分别采用10kDa和5kDa的超滤膜对复合胰蛋白酶制得的海参肽溶液进行超滤,将得到的5kDa以下的海参肽用Sephadex G-25进行分子筛层析,得到280nm吸收值下的两种海参肽组分。利用紫外吸收法分别测得几种组分的多肽浓度,分别测定了四种组分清除羟自由基和超氧阴离子的活性,进而计算出各个组分的相对活性。结果显示,清除超氧阴离子的海参肽分子量主要分布在5kDa以下,清除羟自由基的海参肽是在5kDa以下的组分和Mr>10kDa的海参肽。

全文目录

中文摘要  4-5
Abstract  5-6
目录  6-10
1 绪论  10-20
  1.1 引言  10
  1.2 生物活性肽及其研究进展  10-14
    1.2.1 生物活性肽的种类及应用  11-12
    1.2.2 生物活性肽的生理功能  12-13
    1.2.3 生物活性多肽的制备  13-14
  1.3 海参多肽的研究进展  14-15
  1.4 自由基对机体的影响  15-16
    1.4.1 自由基产生的途径  15
    1.4.2 自由基对机体的损伤  15-16
  1.5 抗氧化性简介及其测定方法研究进展  16-17
  1.6 抗氧化性多肽的研究进展  17-18
  1.7 本课题的立题背景、研究意义和内容  18-20
    1.7.1 立题背景及研究意义  18-19
    1.7.2 研究内容  19-20
2 海参的营养成分测定  20-23
  2.1 材料与方法  20-21
    2.1.1 材料  20
    2.1.2 实验仪器及设备  20
    2.1.3 实验试剂  20-21
    2.1.4 实验方法  21
      2.1.4.1 水分测定  21
      2.1.4.2 蛋白质含量测定  21
      2.1.4.3 其它成分的测定  21
  2.2 结果与讨论  21-23
3 海参肽的制备  23-29
  3.1 材料与方法  23-28
    3.1.1 材料  23
    3.1.2 实验仪器及设备  23
    3.1.3 实验试剂  23
    3.1.4 实验方法  23-28
      3.1.4.1 水解用酶的选择  24
      3.1.4.2 料液比的选择  24
      3.1.4.3 酶解温度的选择  24
      3.1.4.4 加酶量的选择  24
      3.1.4.5 pH的选择  24-25
      3.1.4.6 去除过量乙醇  25-27
      3.1.4.7 制备海参肽  27-28
  3.2 结果与讨论  28-29
4 海参肽抗氧化活性与酶解时间的相关性研究  29-49
  4.1 清除羟自由基活性与酶解时间的关系  29-33
    4.1.1 材料与方法  29-30
      4.1.1.1 材料  29
      4.1.1.2 实验仪器及设备  29
      4.1.1.3 实验试剂  29
      4.1.1.4 实验原理及方法  29-30
    4.1.2 结果与讨论  30-33
  4.2 清除超氧阴离子活性与酶解时间的关系  33-46
    4.2.1 材料与方法  33-34
      4.2.1.1 材料  33
      4.2.1.2 仪器  33
      4.2.1.3 试剂  33
      4.2.1.4 实验方法  33-34
    4.2.2 结果与讨论  34-46
      4.2.2.1 木瓜蛋白酶所得海参肽测得的清除超氧阴离子  34-38
      4.2.2.2 中性蛋白酶A.S.1398所得海参肽的清除超氧阴离子能力测定  38-41
      4.2.2.3 复合胰蛋白酶所得海参肽测得的清除超氧阴离子  41-45
      4.2.2.4 三种酶解液所得海参肽清除超氧阴离子活性随酶解时间变化趋势的比较分析  45-46
  4.3 三种酶所得海参肽抗氧化性综合分析  46-49
    4.3.1 三种酶解所得海参肽清除羟自由基和超氧阴离子的清除率  46-47
    4.3.2 讨论  47-49
5 海参肽的抗氧化性与分子量的相关性研究  49-56
  5.1 海参肽的超滤分离  49-50
    5.1.1 材料与方法  49
      5.1.1.1 实验材料  49
      5.1.1.2 仪器及试剂  49
      5.1.1.3 实验原理及方法  49
    5.1.2 结果与讨论  49-50
  5.2 MR≤5KDA海参肽的分子筛层析分离  50-52
    5.2.1 材料与方法  50
      5.2.1.1 材料  50
      5.2.1.2 实验仪器与设备  50
      5.2.1.3 实验试剂  50
      5.2.1.4 实验方法  50
    5.2.2 结果与讨论  50-52
  5.3 不同分子量段海参肽的抗氧化性研究  52-56
    5.3.1 材料与方法  52-53
      5.3.1.1 材料  52
      5.3.1.2 实验仪器  52
      5.3.1.3 实验试剂  52
      5.3.1.4 实验方法  52-53
    5.3.2 结果与讨论  53-56
6 总结与展望  56-58
  6.1 论文主要结论  56-57
    6.1.1 海参肽抗氧化活性随酶解时间的变化趋势  56
    6.1.2 不同分子量段海参肽的抗氧化活性比较  56-57
  6.2 展望  57-58
参考文献  58-60
致谢  60-61

酶解法制备海参多肽及其抗氧化性能研究

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