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自噬性死亡在塞来昔布对SHG-44细胞辐射增敏效应中作用的初步探讨

作　者: 聂斌
导　师: 周菊英
学　校: 苏州大学
专　业: 肿瘤学
关键词: 自噬脑胶质瘤细胞辐射塞来昔布凋亡
分类号: R965
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的:观察塞来昔布的辐射增敏效应,探讨自噬和自噬性死亡在塞来昔布对脑胶质瘤细胞SHG-44辐射增敏效应中的作用。方法:选择脑胶质瘤细胞株SHG-44作为研究对象,以不同浓度塞来昔布(0、30、50、100μM)设立药物组(D组),以不同剂量6MV-X线照射(0、1、2、4、6、8Gy)设立辐射组(R组),两者交互设立联合组(D+R组)。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色实验检测塞来昔布对SHG-44细胞增殖抑制作用;集落形成法检测塞来昔布对SHG-44辐射增敏作用;流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡;吖啶橙染色、绿色荧光FITC- LC3-Ⅱ抗体和电镜共同检测细胞内自噬体的分布和数量。结果:1. MTT检测显示:塞来昔布抑制SHG-44细胞增殖,与浓度和时间相关,随药物浓度增加以及作用时间延长细胞活性越低(P<0.05)。克隆形成实验结果和细胞存活曲线相关参数显示:塞来昔布增加SHG-44细胞的辐射敏感性,放射增敏比SERD0=1.20。2.流式细胞仪对细胞周期和凋亡的检测显示:塞来昔布30μM诱导肿瘤细胞G2/M期阻滞,并延长辐射8Gy诱导的细胞G2/M期阻滞时间(C、D、R和D+R组的G2/M分别为:9.87±1.34%,20.14±2.52%,29.15±1.99%,34.26±2.20%,P<0.05),而非促进细胞凋亡(R:8.24±0.93%,D+R:9.71±1.24%,P=0.158)。随着辐射剂量增加,G2/M期细胞比例增多(2Gy、6Gy和8Gy G2/M:14.06±1.37%、18.72±3.77%、29.15±1.99%,P<0.05)。3.细胞自噬的检测:①细胞自噬形态学的电镜观察发现塞来昔布组、辐射组和联合组的细胞胞浆内可见不同阶段自噬小体,而无明显的核浓缩和核碎片;②细胞吖啶橙染色发现塞来昔布30μM联合辐射8Gy组细胞胞质内染成红色的酸性囊泡结构数量高于对照组、塞来昔布30μM组和辐射8Gy组(6.19±0.56 vs. 1.08±0.21、1.94±0.06、2.71±0.14,P<0.05);③通过FITC -LC3-Ⅱ标记自噬小体特异性膜蛋白在细胞胞质形成绿色小点,联合组阳性细胞比例高于对照组、药物组和辐射组(43.51±3.26% vs. 9.34±1.05%、18.46±2.67 %、24.81±2.04%, P<0.05)。4.随着辐射剂量的递增G2/M期细胞比例增多,同时细胞自噬水平也相应增加,统计软件对细胞自噬水平和细胞G2/M期比例行相关性分析,显示二者呈线性相关(相关系数r=0.97,P<0.05)。5.随着细胞自噬水平增加,细胞的克隆源性存活呈指数性递减。统计软件分析,显示细胞存活分数与细胞自噬水平成指数性负相关(相关指数R=0.98 P<0.05)。结论:1.塞来昔布在体外实验中提高脑胶质瘤细胞株SHG-44的辐射敏感性。2.塞来昔布增强辐射诱导SHG-44细胞G2/M期阻滞,促进细胞自噬。诱导细胞自噬性死亡,可能是塞来昔布增强脑胶质瘤细胞辐射敏感性机制之一。3.细胞自噬和自噬性死亡可能与细胞G2/M期阻滞有关。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-9
引言  9-11
材料和方法  11-16
结果  16-25
讨论  25-29
结论  29-30
参考文献  30-34
综述自噬与肿瘤辐射耐受性  34-40
  正文  34-38
  参考文献  38-40
缩略词表  40-41
攻读学位期间公开发表的论文  41-42
致谢  42-43

自噬性死亡在塞来昔布对SHG-44细胞辐射增敏效应中作用的初步探讨

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