学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

雌二醇降解菌多食鞘氨醇ED4产酶条件优化及酶学性质研究

作　者: 王飞
导　师: 张丽
学　校: 南京理工大学
专　业: 生物化工
关键词: 雌二醇降解酶产酶条件响应面法酶学性质
分类号: TQ925
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
下　载: 4次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

雌激素是一种在自然界中普遍存在的污染物,其具有危害大、难降解等特点,如何有效的去除环境中的雌激素污染,且不造成二次污染,成为人们亟待解决的问题。本文以实验室筛选保藏的雌二醇降解菌ED4为出发菌株,优化产酶条件,利用超声波破碎法提取雌二醇降解酶,并对其的降解机理和酶学性质做进一步的研究。通过降解酶定位实验确定雌二醇降解酶属于胞内酶。利用单因素实验优化雌二醇降解菌Sphingo. multivorum. ED4的产酶条件,发现在添加1%的葡萄糖为补充碳源、蛋白胨为氮源的产酶培养基中,设置培养温度为30℃,初始pH为7.0,种子活化时间为24h,接种量为2%,将菌株培养72h后,ED4产酶量最大,酶活力达到1.425IU/mL,相比优化前的酶活提高了1.223倍。利用超声波破碎法提取ED4雌二醇降解酶,通过单因素实验确定破碎时间、破碎功率和菌体浓度对超声破碎效果的影响,结合Design-expert8.0.7.1软件做进一步进行响应面法优化破碎条件,确定最佳的超声破碎条件是：破碎功率400W、破碎时间29min、菌体浓度为188mg/mL,在此条件下得到雌二醇降解酶酶活力为1.477IU/mL。关于酶学性质的研究确定,雌二醇降解酶的最适pH为7.0,最适反应温度为30℃,当储存条件的pH为7.0～8.0、温度范围为30～35℃时,有较好的稳定性。考察金属离子对酶促反应的影响发现,Al3+和Sn2+等离子对酶促反应有抑制作用,而Mg2+和Ca2+等离子在不同程度上促进雌二醇酶解反应的进行。并通过气相-质谱联用仪检测到E2醇的中间代谢产物：E1和2-羟基-2-己烯二酸,推测E2醇可能的代谢途径。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-7
目录  7-9
1 绪论  9-18
  1.1 环境中甾体雌激素的概述  9-11
    1.1.1 甾体雌激素的危害  9-10
    1.1.2 环境中雌激素污染来源  10
    1.1.3 环境中雌激素的污染现状  10-11
  1.2 检测、去除环境中的雌激素污染  11-14
    1.2.1 甾体雌激素的检测  11-13
    1.2.2 甾体雌激素的去除  13-14
  1.3 生物法去除环境中的微量雌激素  14-16
    1.3.1 降解雌激素的微生物  14-15
    1.3.2 雌激素降解机理  15-16
  1.4 课题来源与目的  16-18
    1.4.1 课题来源和背景  16-17
    1.4.2 主要研究内容  17-18
2 雌二醇降解菌产酶条件的优化  18-31
  2.1 实验材料  18-20
    2.1.1 菌种来源  18
    2.1.2 储备液和培养基的配置  18
    2.1.3 实验仪器和药品  18-20
  2.2 实验方法  20-21
    2.2.1 菌种活化  20
    2.2.2 粗酶液的制备  20
    2.2.3 培养液中菌体生物量的测定  20
    2.2.4 产酶条件优化实验  20-21
  2.3 分析方法  21-22
    2.3.1 酶活力测定  21
    2.3.2 高效液相色谱(HPLC)分析  21-22
    2.3.3 E2标准曲线的制作  22
  2.4 结果与讨论  22-30
    2.4.1 不同补充碳源对ED4产酶量的影响  22-24
    2.4.2 不同氮源对ED4产酶量的影响  24-25
    2.4.3 培养温度对ED4产酶量的影响  25-26
    2.4.4 起始pH对ED4产酶量的影响  26-27
    2.4.5 接种量对ED4产酶量的影响  27-28
    2.4.6 种子活化时间对ED4产酶量的影响  28-29
    2.4.7 ED4降解菌产酶时程分析  29-30
  2.5 本章小结  30-31
3 超声波破碎法提取E2醇降解酶条件的优化  31-40
  3.1 实验仪器、材料  31
  3.2 实验方法  31-32
    3.2.1 降解菌的培养和酶活力测定  31
    3.2.2 单因素超声波破碎条件的研究  31-32
    3.2.3 响应面法优化超声波破碎法提取E2醇降解酶条件  32
  3.3 结果与分析  32-39
    3.3.1 单因素超声波破碎条件的研究  32-34
    3.3.2 雌二醇降解酶超声波破碎条件的优化  34-39
  3.4 本章小结  39-40
4 雌二醇降解酶酶学性质及降解机理的初步研究  40-49
  4.1 实验方法及步骤  40-41
    4.1.1 粗酶液的制备及酶活力的测定  40
    4.1.2 E2醇降解酶酶学性质的初步研究  40-41
    4.1.3 E2降解机理的初探  41
  4.2 结果与讨论  41-47
    4.2.1 E2醇降解酶酶学性质的初步研究  41-45
    4.2.2 金属离子对E2醇降解酶的影响  45-46
    4.2.3 E2降解机理的初探  46-47
  4.3 结论  47-49
5 结论与建议  49-51
  5.1 全文总结  49-50
  5.2 建议  50-51
致谢  51-52
参考文献  52-58

雌二醇降解菌多食鞘氨醇ED4产酶条件优化及酶学性质研究

内容摘要

全文目录

相似论文