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南瓜籽蛋白制备及其活性多肽的研究

作　者: 刘艳荣
导　师: 范三红
学　校: 山西大学
专　业: 食品科学
关键词: 南瓜籽 蛋白质 功能性质 活性肽 响应面法 超滤
分类号: TS201.21
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


本文以南瓜籽为研究对象,用超临界二氧化碳萃取技术脱除油脂,研究饼粕中蛋白质的提取工艺和功能性质,制备活性多肽的酶水解工艺,以及超滤技术对酶解液的分级分离过程,同时分别用SDS-PAGE凝胶电泳技术和凝胶柱层析技术分析南瓜籽蛋白和多肽的分子量分布情况,并通过体外实验初步评价南瓜籽酶解液的抗氧化活性和降血压活性,得到如下结论：1、碱溶酸沉淀法提取南瓜籽蛋白的最佳工艺条件是：温度为50℃,料液比为1：30,pH值为11,浸提时间为1.5h。在此条件下蛋白质的提取率达到85.52%,纯度为91.07%。南瓜籽蛋白的第一限制性氨基酸为含硫氨基酸,其次为赖氨酸,必需氨基酸指数高达0.8687,是一种良好的蛋白资源。2、南瓜籽蛋白的溶解度随pH变化呈V型曲线,在pH为5.0-6.0时溶解度最小；吸水性和吸油性都在1.2～1.6g/g左右；乳化能力在适宜pH下达到80%以上；起泡性则相对较弱。南瓜籽分离蛋白的SDS-PAGE电泳得到至少7条谱带,分子量主要分布在35KDa、45KDa左右以及25KDa以下。3、采用Plackett-Burman实验设计结合响应面优化酸性蛋白酶制备南瓜籽抗氧化肽的工艺条件,最终确定水解条件为：温度50℃、水解pH 2.5、水解时间5 h、底物浓度0.05 g/mL、加酶量6000 U/g,在该条件下得到的DPPH清除率为92.82%。4、通过单因素实验初步确定Alcalase蛋白酶制备南瓜籽降血压肽的最佳工艺参数为：加酶量6000U/mL, pH为8,温度为55℃,底物浓度为0.06g/mL,水解时间为4h,此时水解度为12.74%。5、南瓜籽酶解液一次超滤的工艺参数为：操作压力0.25MPa、料液浓度为3%、料液pH为7,操作时间为60min；二次超滤的工艺参数为：操作压力0.2MPa、料液浓度为2%、料液pH为7,操作时间为60min。酸性蛋白酶解液和Alcalase蛋白酶解液经过超滤以后分子量小于4000Da的组分均占到95%以上,且分别具有更强的抗氧化活性和降血压活性。

全文目录


中文摘要  10-11ABSTRACT  11-13第一章 绪论  13-23  1.1 南瓜籽的研究概况  13-16    1.1.1 南瓜籽的营养组成  13-14    1.1.2 南瓜籽的开发利用  14-15    1.1.3 南瓜籽的保健功能  15-16  1.2 南瓜籽蛋白的研究概况  16-19    1.2.1 南瓜籽蛋白的组成  16-17    1.2.2 南瓜籽蛋白质的营养价值  17    1.2.3 南瓜籽蛋白的制备  17-18    1.2.4 南瓜籽蛋白的功能性质  18-19  1.3 南瓜籽多肽的研究状况  19  1.4 生物活性肽的研究  19-21    1.4.1 生物活性肽的制备  20    1.4.2 酶解制备抗氧化肽的研究  20-21    1.4.3 酶解制备降血压肽的研究  21  1.5 本课题研究意义及主要内容  21-23第二章 南瓜籽蛋白的制备及其功能性质研究  23-33  2.1 材料及仪器  23    2.1.1 材料与试剂  23    2.1.2 仪器与设备  23  2.2 实验方法  23-25    2.2.1 基本成分测定方法  23    2.2.2 原料预处理方法  23-24    2.2.3 南瓜籽分离蛋白的提取方法  24-25    2.2.4 氨基酸组成分析及营养价值评价方法  25    2.2.5 南瓜籽分离蛋白功能性质测定方法  25    2.2.6 蛋白质分子量分布的测定方法  25  2.3 结果与分析  25-32    2.3.1 南瓜籽的基本化学组成  25-26    2.3.2 南瓜籽蛋白提取工艺的确定  26-28    2.3.3 南瓜籽蛋白的氨基酸组成及分析  28-30    2.3.4 南瓜籽蛋白的功能性质  30-32    2.3.5 南瓜籽蛋白的电泳分析  32  2.4 本章小结  32-33第三章 南瓜籽抗氧化肽的酶解工艺研究  33-46  3.1 材料与仪器  33-34    3.1.1 材料与试剂  33    3.1.2 仪器及设备  33-34  3.2 实验方法  34-36    3.2.1 测定方法  34    3.2.2 南瓜籽蛋白酶解液的制备  34-35    3.2.3 蛋白酶的筛选实验  35    3.2.4 单因素实验设计  35    3.2.5 酶解工艺条件的优化  35-36  3.3 结果与分析  36-44    3.3.1 蛋白酶的筛选  36-37    3.3.2 酸性蛋白酶酶解的单因素结果  37-39    3.3.3 Plackett-Burman设计确定关键影响因素  39-41    3.3.4 酸性蛋白酶酶解的响应面优化  41-44  3.4 本章小结  44-46第四章 南瓜籽降血压肽的酶解工艺研究  46-50  4.1 材料与仪器  46    4.1.1 材料与试剂  46    4.1.2 仪器与设备  46  4.2 实验方法  46-47    4.2.1 水解度的测定  46    4.2.2 降血压活性的测定  46-47    4.2.3 南瓜籽蛋白酶解液的制备  47  4.3 结果与讨论  47-49    4.3.1 不同酶酶解效果的比较  47    4.3.2 南瓜籽蛋白酶解液的水解度与ACE抑制活性的关系  47-48    4.3.3 Alcalase蛋白酶酶解条件的优化  48-49  4.4 本章小结  49-50第五章 南瓜籽酶解液的超滤分离及其活性研究  50-59  5.1 材料与仪器  50-51    5.1.1 材料与试剂  50    5.1.2 仪器与设备  50-51  5.2 实验方法  51-52    5.2.1 南瓜籽蛋白酶解液的预处理  51    5.2.2 南瓜籽蛋白酶解液的分级膜分离研究  51    5.2.3 膜通量的测定  51    5.2.4 膜效能的测定  51    5.2.5 蛋白质含量的测定  51    5.2.6 多肽含量的测定  51    5.2.7 分子量分布的测定  51-52    5.2.8 酶解液抗氧化能力的测定  52    5.2.9 酶解液降血压活性的测定  52  5.3 结果与分析  52-57    5.3.1 南瓜籽蛋白酶解液超滤工艺研究  52-55    5.3.2 南瓜籽多肽的相对分子量分夼  55-56    5.3.3 酸性蛋白酶解液超滤前后抗氧化活性的研究  56-57    5.3.4 Alcalase蛋白酶解液超滤前后降血压活性的研究  57  5.4 本章小结  57-59第六章 结论与展望  59-60参考文献  60-67附录  67-68致谢  68-70

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中图分类: > 工业技术 > 轻工业、手工业 > 食品工业 > 一般性问题 > 基础科学 > 食品化学 > 蛋白质
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