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两种糖基转移酶与共刺激分子B7-H3相互作用的初步探讨

作　者: 蒋俊华
导　师: 周迎会
学　校: 苏州大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: ppGalNAc-T2 β3Gn-T8/β3GalT7 B7-H3 结构生物信息学免疫共沉淀
分类号: Q55
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的:人多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶-2(ppGalNAc-T2)是多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶(ppGalNAc-T)家族中重要的成员,β1,3-N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶/β1,3半乳糖基转移酶(β3Gn-T8/β3GalT7)是本实验室在国际上首先从人肺cDNA文库中克隆得到的,现已发现该酶兼具半乳糖转移酶和乙酰氨基葡萄糖转移酶的催化活性,ppGalNAc-T2,β3Gn-T8/β3GalT7在蛋白质O-糖链合成中均起着重要作用。人共刺激分子B7-H3为Ⅰ型跨膜糖蛋白,已有研究报道B7-H3氨基酸序列上有相当数量的糖基化位点。本文期望通过对B7-H3与ppGalNAc-T2,β3Gn-T8/β3GalT7的相互关系进行研究,探索两种糖基转移酶在B7-H3分子蛋白质翻译后修饰中起的作用。方法:B7-H3两种剪接体(2IgB7-H3,4IgB7-H3)的分子结构模拟,获得可靠的B7-H3两种剪接体的分子结构模型。将这两个分子结构与ppGalNAc-T2蛋白质晶体结构连接,分析它们潜在的接触位点。同时,模拟β3Gn-T8/β3GalT7的分子结构模型,分析B7-H3分子与β3Gn-T8/β3GalT7潜在的具体接触位点。免疫共沉淀研究B7-H3与ppGalNAc-T2两者之间的相互作用,初步验证前面的分子模拟的结果。结果:成功地模拟了共刺激分子B7-H3两种剪接体的分子结构,发现ppGalNAc-T2与共刺激分子B7-H3有相互结合的可能性。成功模拟了β3Gn-T8/β3GalT7的分子结构模型,发现共刺激分子B7-H3与β3Gn-T8/β3GalT7有潜在的接触位点。同时,发现ppGalNAc-T2与共刺激分子B7-H3能共沉淀,两者有相互作用。结论:模拟得到了B7-H3分子的两种不同的剪接体和β3Gn-T8/β3GalT7的三维分子结构,结构生物信息学的研究发现B7-H3分子与β3Gn-T8/β3GalT7分子有潜在的接触位点。B7-H3与ppGalNAc-T2分子对接模拟和免疫共沉淀结果表明:ppGalNAc-T2分子可能参与B7-H3蛋白质的O-糖链合成反应,并且很有可能通过直接接触来催化控制B7-H3分子的O-糖链合成。

全文目录

中文摘要  5-7
Abstract  7-10
前言  10-18
第一部分：多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶-2 与共刺激分子87-H3 相互作用的初步探讨  18-38
  Ⅰ结构信息学方法  18-27
    1. 材料和方法  18-19
    2. 结果  19-24
    3. 讨论  24-25
    参考文献  25-27
  Ⅱ免疫共沉淀方法  27-38
    1. 材料与方法  27-31
    2. 方法  31-34
    3. 结果  34-36
    4. 讨论  36-37
    参考文献  37-38
第二部分:人 β1,3-N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶/β1,3 半乳糖基转移酶与共刺激分子 4IgB7-H3 相互作用的结构生物信息学初步探讨  38-46
  1. 材料与方法  38-39
  2. 结果  39-44
  3. 讨论  44-45
  参考文献  45-46
小结  46-47
展望  47-48
附录一缩略词表  48-50
附录二攻读学位期间发表的论文  50-51
本课题的受资助情况  51-52
致谢  52-54

两种糖基转移酶与共刺激分子B7-H3相互作用的初步探讨

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