学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

CMO启动子驱动CMO基因提高转基因Micro-Tom耐盐性

作　者: 赖鹭迪
导　师: 李秋莉
学　校: 辽宁师范大学
专　业: 植物学
关键词: CMO基因 CMO启动子 耐盐性 Micro-Tom
分类号: Q943.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
下　载: 1次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


在植物抗逆基因工程中,组成型启动子已经被广泛应用,虽然组成型启动子驱动外源基因表达可以提高转基因植物的抗逆性,但会导致转基因植物生长迟缓甚至不育。应用胁迫诱导型启动子就可以解决这个问题。胆碱单加氧酶(choline monooxygenase,CMO)是合成甜菜碱的关键酶,其启动子(pC5：-267～+lbp)是盐诱导型启动子。本研究用农杆菌介导的叶盘转化法分别将pC5-CMO和CaMV35S-CMO转入Micro-Tom(Solanum lycopersicum L.cv.Micro-Tom)中,对两种转基因Micro-Tom中CMO基因拷贝数、CMO基因表达、转基因植株的耐盐性及生长状况进行分析。主要结果如下：1、通过农杆菌转化法成功获得了pC5-CMO、CaMV35S-CMO转基因Micro-Tom,通过对这些转基因植株中外源CMO基因拷贝数的检测,获得了单拷贝及低拷贝的转基因植株。2、利用荧光定量PCR法对单拷贝的转基因植株中外源CMO基因的表达量进行检测,结果显示,在正常条件下pC5-CMO转基因植株中CMO基因表达量低于CaMV35S-CMO转基因植株,而在200mmol/L NaCl胁迫处理48h后,pC5-CMO转基因植株中CMO基因表达量增加6.7倍,CaMV35S-CMO转基因植株中CMO基因依然过量表达无明显变化。3.200mmol/L NaCl胁迫处理野生和转基因Micro-Tom一周后,野生Micro-Tom几乎死亡,转基因Micro-Tom生长正常。转pC5-CMO、CaMV35S-CMO基因提高了Micro-Tom的抗盐性。4.CaMV35S-CMO转基因Micro-Tom均表现出株型矮小、生长迟缓、产量下降、落花等现象,pC5-CMO转基因Micro-Tom的营养生长、开花和产量基本和野生Micro-Tom相同。5、获得了既抗盐、又能正常生长的pC5-CMO转基因Micro-Tom； pC5一CMO可以提高转基因植株的耐盐性,且不影响其生长与产量。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-10
第1章 绪论  10-21
  1.1 植物启动子分类及研究进展  10-14
    1.1.1 组成型启动子  10
    1.1.2 组织特异性启动子  10-11
    1.1.3 诱导型启动子  11-14
  1.2 CMO基因及其启动子  14-15
    1.2.1 CMO基因  14-15
    1.2.2 CMO启动子  15
  1.3 影响农杆菌介导番茄遗传转化的因素及研究展望  15-18
    1.3.1 影响因素  16-17
    1.3.2 番茄遗传转化研究展望  17-18
  1.4 Micro-Tom番茄  18-19
    1.4.1 Micro-Tom品种由来  18
    1.4.2 Micro-Tom的生物学特征  18
    1.4.3 Micro-Tom遗传转化研究  18-19
  1.5 转基因植株检测方法  19-20
  1.6 本研究的目的及意义  20-21
第2章 Micro-Tom遗传转化及转基因植株的检测  21-39
  2.1 实验材料  21-22
    2.1.1 植物材料  21
    2.1.2 菌株  21
    2.1.3 试剂  21
    2.1.4 培养基  21
    2.1.5 仪器设备  21-22
  2.2 实验方法  22-30
    2.2.1 工程菌的检测及培养  22-23
    2.2.2 Micro-Tom番茄的转化  23-24
    2.2.3 转基因植株PCR检测  24-25
    2.2.4 转基因植株RT-PCR检测  25-26
    2.2.5 荧光实时定量PCR检测转基因植株中外源CMO基因拷贝数  26-30
  2.3 实验结果  30-38
    2.3.1 工程菌的检测  30
    2.3.2 Micro-Tom番茄的转化  30-32
    2.3.3 转基因植株PCR检测  32-33
    2.3.4 转基因植株RT-PCR检测  33-34
    2.3.5 荧光实时定量PCR检测转基因植株中外源CMO基因拷贝数  34-38
  2.4 讨论  38-39
第3章 CMO基因在转基因Micom-Tom中的表达  39-45
  3.1 实验材料  39
    3.1.1 植物材料  39
    3.1.2 试剂  39
    3.1.3 仪器设备  39
  3.2 实验方法  39-42
    3.2.1 野生及转基因Micom-Tom的水培  39-40
    3.2.2 野生及转基因Micom-Tom的盐胁迫处理  40
    3.2.3 转基因Micom-Tom中CMO基因的表达  40-42
  3.3 实验结果  42-43
    3.3.1 Micom-Tom总RNA的提取  42
    3.3.2 转基因Micom-Tom中CMO基因的表达  42-43
  3.4 讨论  43-45
第4章 转基因Micro-Tom抗盐性及表型分析  45-52
  4.1 实验材料  45
    4.1.1 植物材料  45
    4.1.2 培养基  45
  4.2 实验方法  45-46
    4.2.1 野生及转基因Micro-Tom的水培  45
    4.2.2 野生及转基因Micro-Tom的盐胁迫处理  45
    4.2.3 Micro-Tom的移栽  45-46
  4.3 实验结果  46-50
    4.3.1 转基因Micro-Tom抗盐性分析  46-47
    4.3.2 转基因Micro-Tom生长状况及产量  47-50
  4.4 讨论  50-52
结论  52-53
参考文献  53-61
附录A：CMO基因及启动子序列  61-62
附录B：载体图谱  62-63
附录C：载体图谱  63-64
附录D：DNA Markers  64-65
附录E：各种培养基配方  65-67
致谢  67

相似论文

  1. 超表达OsSsr1基因烟草的获得及其抗逆性分析,S572
  2. 钙提高西瓜植株耐盐性的生理机制及其对果实品质的影响,S651
  3. 荷花液泡膜型Na~+/H~+逆向转运蛋白基因NnNHX1的克隆及转基因烟草耐盐性的初步分析,S682.32
  4. 杜氏盐藻生理生化鉴定及高质量cDNA文库表达序列标签分析,Q943.2
  5. 基于实时荧光定量PCR的植物转基因检测技术的改进与应用,S641.2;S666
  6. 五种木瓜属植物耐盐性的研究,S685.99
  7. 9个葡萄砧木和品种的抗寒性及耐盐性鉴定,S663.1
  8. 四种暖季型草坪草的耐盐性研究,S688.4
  9. CMO启动子盐诱导功能元件鉴定及转录因子分离,Q943.2
  10. 农杆菌介导的碱蓬液泡膜H~+-ATPases基因转化苜蓿的研究,Q943.2
  11. 聚合betA/TsVP基因提高棉花耐盐性及共转化法获得基因聚合棉花的研究,Q943.2
  12. 生物接触氧化法处理腌制废水最佳运行方式及耐盐性研究,X703
  13. 菊芋耐盐性的初步研究,S632.9
  14. 8个野生早熟禾种质材料种子萌发特性与耐盐性研究,S688.4
  15. 锌指蛋白TaCHP基因对小麦的转化,S512.1
  16. 盐胁迫对三个海棠砧木品种生理及生长的影响,S661
  17. 外源GA_3和SA对德国鸢尾耐盐性的影响,S682.19
  18. 不同苹果砧穗组合耐盐性研究,S661.1
  19. 秦巴山区5种野生百合耐盐性的初步评价,S682.29
  20. 耐盐性狗牙根属植物筛选,S688.4
  21. 棉花耐盐性的SSR鉴定及其研究,S562

中图分类: > 生物科学 > 植物学 > 植物细胞遗传学 > 植物基因工程
© 2012 www.xueweilunwen.com