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白屈来碱对人胃癌细胞SGC-7901的G_2/M期阻滞作用及机制研究

作　者: 韦祖巧
导　师: 季宇彬
学　校: 哈尔滨商业大学
专　业: 中药学
关键词: 白屈菜碱人胃癌SGC-7901细胞 G2/M期阻滞有丝分裂阻滞
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

白屈菜碱(Chelidonine)为中药白屈菜(罂粟科白屈菜属植物白屈菜(Chelidonium majus L.)的干燥全草)的主要活性成分,属于苯并菲啶类生物碱。癌症患者在整个疾病过程中或多或少地要经受不同程度的疼痛折磨,长期得不到疼痛治疗的病人易出现神经功能紊乱、内分泌失调、免疫功能下降等严重的问题而影响肿瘤的治疗。白屈菜碱一直作为止痛药应用于临床,主要用于治疗由放化疗或非放化疗的肺癌、肝癌、胃癌等属血瘀引发的癌性中度疼痛。随着对白屈菜碱药理作用的深入研究发现白屈菜碱具有抗肿瘤作用,且其抗肿瘤作用越来越受到关注。从目前国内外研究情况来看,白屈菜碱的抗肿瘤作用是明确的,抗肿瘤的机制有待进一步系统的研究。肿瘤是一类细胞周期紊乱性疾病,研究药物对肿瘤细胞的细胞周期调控并希望通过此途径来寻找治疗肿瘤的新靶点引起人们的密切关注。有丝分裂期是细胞周期最重要的组成部分,是一个非常复杂和精细的调节过程。有大量的调节蛋白参与包括中心体循环、纺锤体检查点、微管-着丝粒黏附、纺锤体组装和染色质凝聚等有丝分裂事件。此过程中发生错误会导致染色体的不稳定性和非整倍体的形成和肿瘤的发生,因此有丝分裂相关蛋白的细胞内调控机制成为研究重点。本课题从调控细胞周期的相关基因的蛋白表达和有丝分裂期特异性H3 Ser10组蛋白的磷酸化作用角度探讨白屈菜碱的抗癌分子机制,为今后进一步开发抗癌新药提供科学依据。本课题首先采用MTT法和SRB法测定白屈菜碱对SGC-7901细胞增殖的影响,结果表明,白屈菜碱作用SGC-7901细胞48h后,能显著抑制SGC-7901细胞的增殖,并且呈一定的剂量依赖性, IC50分别为24.55μmol/L和23.41μmol/L。采用流式细胞仪检测白屈菜碱对人胃癌SGC-7901细胞的周期的影响,结果表明,6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L的白屈菜碱作用SGC-7901细胞48h后,能够升高SGC-7901细胞G2/M期的细胞比例, G2/M期细胞比例的升高呈一定的剂量依赖性,白屈菜碱对SGC-7901细胞具有G2/M期阻滞作用。进一步采用Western Blot法检测白屈菜碱对人胃癌SGC-7901细胞cdkl, p-cdkl(Thr14), cyclinB1, p-H3 Ser10等G2/M期相关蛋白表达的影响,结果表明,6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L的白屈菜碱作用SGC-7901细胞48 h后,均可显著下调cdk1、cyclinB1、p-H3 Ser10蛋白表达水平,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01),同时显著上调p-cdkl(Thr14)和表达水平,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。综上所述,白屈菜碱诱导人胃癌SGC-7901细胞发生G2/M期阻滞作用；可通过降低cdk1-cyclinB1复合物的形成,同时通过上调p-cdkl(Thrl4)表达来抑制cdkl或cdkl-cyclinB1复合物的活性,诱导SGC-7901细胞发生G2/M期阻滞；白屈菜碱能抑制H3Ser10组蛋白的磷酸化作用,说明白屈菜碱能诱导SGC-7901细胞阻滞于有丝分裂期,其作用机制有待于进一步研究。

全文目录

摘要  5-7
Abstract  7-11
1 绪论  11-26
  1.1 肿瘤学概述  11-16
    1.1.1 肿瘤概念  11
    1.1.2 肿瘤发病原因及机制  11-13
    1.1.3 肿瘤治疗主要技术方法  13
    1.1.4 抗肿瘤药物研究的新靶点与新进展  13-16
  1.2 细胞周期调控与肿瘤  16-21
    1.2.1 细胞周期及细胞周期检验点调控  17-18
    1.2.2 G_2/M检验点调控与肿瘤  18-21
  1.3 组蛋白H3 Ser10磷酸化  21-22
  1.4 白屈菜碱的国内外研究现状  22-24
    1.4.1 白屈菜碱的产生及化学性质  22-23
    1.4.2 白屈菜碱的抗肿瘤作用及机制  23
    1.4.3 其他药理作用  23-24
  1.5 本课题来源及研究的意义  24-25
    1.5.1 课题来源  24
    1.5.2 本课题研究的意义  24-25
  1.6 论文的研究内容  25-26
    1.6.1 白屈菜碱对人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制作用的研究  25
    1.6.2 白屈菜碱对人胃癌SGC-7901细胞周期分布的影响  25
    1.6.3 白屈菜碱诱导人胃癌SGC-7901细胞G_2/M期阻滞作用机制的研究  25
    1.6.4 白屈菜碱对人胃癌SGC-7901细胞p-H3 Ser10蛋白表达的影响  25-26
2 白屈菜碱对人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制作用的研究  26-32
  2.1 引言  26
  2.2 实验部分  26-29
    2.2.1 实验材料  26-27
    2.2.2 实验方法  27-29
  2.3 实验结果  29-31
    2.3.1 MTT实验结果与分析  29-30
    2.3.2 SRB实验结果与分析  30-31
  2.4 本章小结  31-32
3 白屈菜碱对人胃癌SGC-7901细胞周期的影响研究  32-36
  3.1 引言  32-33
  3.2 实验部分  33-34
    3.2.1 实验材料  33-34
    3.2.2 实验方法  34
  3.3 实验结果  34-35
  3.4 本章小结  35-36
4 白屈菜碱诱导人胃癌SGC-7901细胞G_2/M期阻滞作用机制的研究  36-45
  4.1 引言  36-37
  4.2 实验部分  37-44
    4.2.1 实验材料  37-40
    4.2.2 实验方法  40-41
    4.2.3 实验结果  41-44
  4.3 本章小结  44-45
5 白屈菜碱对组蛋白p-H3 Ser10表达的影响  45-51
  5.1 引言  45
  5.2 实验部分  45-49
    5.2.1 实验材料  45-48
    5.2.2 实验方法  48-49
  5.3 实验结果  49-50
  5.4 本章小结  50-51
6 讨论  51-55
  6.1 白屈菜碱对人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制作用的研究  51-52
  6.2 白屈菜碱诱导人胃癌SGC-7901细胞周期阻滞作用研究  52
  6.3 白屈菜碱诱导人胃癌SGC-7901细胞G_2/M期阻滞作用机制研究  52-54
  6.4 白屈菜碱对p-H3 Ser10组蛋白表达的影响  54-55
结论  55-56
参考文献  56-63
攻读学位期间发表的学术论文  63-64
致谢  64

白屈来碱对人胃癌细胞SGC-7901的G_2/M期阻滞作用及机制研究

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