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蛛网膜下腔出血脑血管痉挛大鼠脑神经突触蛋白质组学初探

作　者: 毛蕾蕾
导　师: 孙保亮
学　校: 泰山医学院
专　业: 神经病学
关键词: 蛛网膜下腔出血脑血管痉挛 SynapsinⅠ 双向凝胶电泳
分类号: R743.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的1.研究SAH大鼠脑神经突触蛋白SynapsinⅠ及其磷酸化水平的动态变化,探讨SynapsinⅠ及其磷酸化在SAH发生发展过程中的作用。2.构建正常和SAH大鼠脑神经突触蛋白质组的双向凝胶电泳图谱,为进一步寻找疾病特异性相关蛋白,从神经突触角度研究SAH后CVS发生机制奠定基础。方法1.选用健康成年Wistar大鼠,采用枕大池动脉血溶血物注入法建立SAH模型,将动物随机分为假手术组和SAH组,各组再随机分为0d、术后1d、3d、5d、14d五个亚组。用体视显微镜及活体循环检测系统动态观察活体基底动脉管径;制备脑组织石蜡切片后免疫组织化学方法染色,在光学显微镜下观察SynapsinⅠ及其磷酸化蛋白在脑组织中的分布,以及表达水平的动态变化。2.选用健康成年Wistar大鼠,采用枕大池动脉血溶血物注入法建立SAH模型,将动物随机分为正常对照组、假手术组、SAH后1h、1d、3d、5d、14d组。各组动物断头取脑后制备脑组织匀浆,采用蔗糖密度梯度离心法分别提取皮层和海马神经突触小体,裂解后进行Western blot检测,分析各组样本SynapsinⅠ及磷酸化SynapsinⅠ表达量的差异。3.选用健康成年Wistar大鼠,采用枕大池动脉血溶血物注入法建立SAH模型,将动物随机分为正常对照组、SAH后3d组。各组动物断头取脑后制备脑组织匀浆,采用蔗糖密度梯度离心法分别提取皮层和海马神经突触小体,裂解后纯化蛋白,进行双向凝胶电泳(2-DE),构建2-DE图谱。结果1.与假手术组相比, SAH大鼠颅脑可见蛛网膜下腔中弥漫分布的溶血物,基底动脉明显收缩痉挛。SynapsinⅠ免疫沉着物主要分布在神经毡内,大脑皮层中表达量少,海马CA1-CA4区表达量均较多,尤其齿状回门区和CA4区表达最为明显。模型组大鼠SynapsinⅠ在皮层、海马各时间点的表达量较假手术组均下降,术后1d即可见明显下降,3d达到最低(P<0.01),后逐渐恢复,至14d时基本达到假手术组水平。P-synⅠ表达水平动态变化趋势与SynapsinⅠ基本一致,但表达量较少,且SAH后表达量降低更为显著。2.采用蔗糖密度梯度离心法提取神经突触体,可以成功构建出蛛网膜下腔出血大鼠大脑皮层和海马神经突触蛋白的2-DE图谱,图谱结果显示,大鼠脑突触蛋白的等电点(PI)基本都在4-7之间。分离效果较好,经对比分析,分别找出大脑皮层样本差异蛋白13个,海马样本差异蛋白12个。结论1.采用枕大池动脉血溶血物注入法可以制作出较稳定的SAH模型,术后3天可出现脑血管明显痉挛。2.SAH后大鼠大脑皮层和海马SynapsinⅠ及其磷酸化含量均明显降低,以SAH后3d降低最为显著,说明SynapsinⅠ水平及其磷酸化与SAH后CVS的发生发展存在一定的相关性。3.成功构建了SAH大鼠大脑皮层和海马神经突触蛋白质组的双向电泳图谱,为进一步寻找SAH特异性相关蛋白奠定了基础。

全文目录

中文摘要  5-7
英文摘要  7-10
符号说明  10-11
前言  11-15
  参考文献  14-15
第一部分  15-43
  中文摘要  15-17
  英文摘要  17-19
  前言  19-21
  材料与方法  21-28
  结果  28-32
  讨论  32-37
  结论  37-38
  附图  38-41
  参考文献  41-43
第二部分  43-64
  中文摘要  43-45
  英文摘要  45-46
  前言  46-48
  材料与方法  48-54
  结果  54-56
  讨论  56-60
  结论  60-61
  附图  61-63
  参考文献  63-64
综述  64-72
  参考文献  68-72
致谢  72-73
攻读学位期间发表的学术论文  73

蛛网膜下腔出血脑血管痉挛大鼠脑神经突触蛋白质组学初探

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