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免疫球蛋白G在甲状腺乳头状癌中的表达及其与补体蛋白的共定位

作　者: 邱亚梅
导　师: 顾江
学　校: 汕头大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 甲状腺乳头状癌免疫球蛋白G C1q C3c C4c
分类号: R736.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

背景和目的除了经典的产生免疫球蛋白G (Immunoglobulin G,IgG)的细胞包括成熟的B淋巴细胞和浆细胞外,近年来,许多学者发现免疫球蛋白G也可由非淋巴细胞产生,包括癌细胞、神经元和一些特殊的上皮细胞等,同时发现免疫球蛋白G能够促进肿瘤细胞的生长和转移。本研究将探讨甲状腺乳头状癌(Papillary thyroid cancer,PTC)细胞是否能够产生免疫球蛋白G,及其产生的机制和功能。同时还探讨补体蛋白(C1q,C3c和C4c)在甲状腺乳头状癌细胞中的表达情况。材料与方法1研究对象收集汕头大学医学院病理科2009年到2010年间甲状腺乳头状癌组织标本44例,其中女性40例(90.1%)、平均年龄45岁、发生淋巴结转移的病例15例(34.1%)。2免疫组织化学(Immunohistochemistry, IHC) PV-9000通用型二步法检测石蜡切片中IgGγ重链、C1q、C3c和C4c的表达情况,以及甲状腺乳头状癌细胞是否表达IgG Fc特异性受体(CD16、CD32、CD64和FcRn)。3制备地高辛标记的cRNA探针制备免疫球蛋白1重链恒定区(Constant region of human IgG1 heavy chain, IGHG1)探针和补体3 (Complement 3, C3)探针。4原位杂交技术(In Situ Hybridization, ISH)检测石蜡切片中IGHG1 mRNA和C3 mRNA的表达。5激光显微切割技术(Laser Capture Micro-dissection, LCM)切割PTC组织冰冻切片中的PTC细胞。6 RT-PCR (Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction)检测PTC细胞中IGHG1 mRNA、IgκmRNA、RAG1 mRNA、RAG2 mRNA和AID mRNA的表达。7半定量分析IgGγ重链的表达对组织芯片IgGγ重链的表达情况进行H-score评分。8统计学分析运用SPSS13.0统计软件进行分析处理,采用非参数检验的Mann-Whitney方法,P < 0.05为差异有统计学意义,P< 0.01为差异具有显著性。结果1免疫组化PTC细胞表达IgGγ重链、Igκ轻链、C1q、C3c和C4c,阳性部位都位于细胞浆中。80%的研究病例(35/44)表达IgGγ重链,59% (26/44)表达Igκ轻链。60%的研究病例(12/20)表达C1q、C3c和C4c。通过连续性切片的免疫组化染色发现,IgGγ重链、C1q、C3c和C4c在同一个PTC细胞中的表达。IgG特异性Fc受体在PTC细胞中无表达。2原位杂交技术IGHG1 mRNA在PTC细胞胞浆中有表达,C3 mRNA在PTC细胞中无表达。3 LCM相关的RT-PCR IGHG1、Igκ,、RAG1、RAG2和AID mRNA在PTC细胞中有表达。4统计学分析IgGγ重链的表达与肿瘤大小有关,肿瘤越大,IgGγ表达越多,且差异有统计学意义。IgGγ重链的表达在正常甲状腺组织与癌组织中的差异具有显著性。同时IgGγ重链的表达与淋巴结转移的差异同样有统计学意义。结论PTC细胞可以产生IgG,且IgG能够促进肿瘤细胞的生长和转移。IgG与C1q、C3c和C4c在同一细胞中的表达表明有免疫复合物的产生,这种免疫复合物的形成可能会保护肿瘤细胞逃避补体系统的攻击。这一发现将可能有助于我们从全新的角度研究肿瘤的发生机制,同时为肿瘤的诊断、治疗及预防提供新的实验依据。

全文目录

中文摘要  3-5
英文摘要  5-8
缩略词  8-11
前言  11-14
材料和方法  14-34
  1 材料  14-20
    1.1 标本来源  14
    1.2 主要仪器设备  14-15
    1.3 主要试剂  15-18
    1.4 主要溶液配制  18-20
  2 方法  20-34
    2.1 免疫组织化学技术  20-22
    2.2 探针制备  22-29
    2.3 原位杂交技术  29-30
    2.4 显微切割技术  30
    2.5 提RNA，RT-PCR  30-33
    2.6 定量分析IgGγ重链的表达  33
    2.7 统计学分析  33-34
结果  34-44
  3.1 免疫组化结果  34-38
    3.1.1 IgG蛋白和补体蛋白在甲状腺乳头状癌细胞中的表达情况  34
    3.1.2 甲状腺乳头状癌组织中IgG特异性Fc受体的表达情况  34-38
  3.2 原位杂交结果显示甲状腺乳头状癌组织中IGHG1 m RNA和C3 mRNA的表达情况  38-39
  3.3 甲状腺乳头状癌细胞中RAG1、RAG2 和AID基因的表达情况  39
  3.4 半定量分析IgGγ重链在甲状腺乳头状癌组织芯片中的表达  39-44
讨论  44-48
  IgG在PTC细胞中的表达  44-45
  补体蛋白在PTC细胞中的表达  45-46
  IgG促进肿瘤的生长和转移  46-48
结论  48-49
参考文献  49-54
致谢  54-55
个人简历  55

免疫球蛋白G在甲状腺乳头状癌中的表达及其与补体蛋白的共定位

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