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溺死大鼠肺表面活性物质相关蛋白A和水通道蛋白5表达的初步研究

作　者: 张吉
导　师: 董红梅
学　校: 华中科技大学
专　业: 法医病理学
关键词: 法医病理学溺死肺表面活性物质相关蛋白A 水通道蛋白5
分类号: D919.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

【研究背景、目的】水尸是法医学鉴定的重要内容之一，其鉴定的关键是判断生前溺死还是死后抛尸。目前溺死的鉴定主要依赖于病理形态学改变和实验室检查。在病理形态学中，蕈样泡沫和水样肺气肿具有重要的意义，但其缺乏特异性，且受死后时间和腐败的影响较大。硅藻检查是常用溺死诊断常用的辅助方法，但存在易污染、工作量大以及检出率低等问题，因此寻找有诊断价值的溺死鉴定指标仍然是法医学研究的一大主题。随着分子生物学技术的发展，有学者尝试将分子生物学方法应用于溺死的鉴定。肺表面活性物质相关蛋白A（SP-A）和水通道蛋白5（AQP-5）在稳定肺组织结构及代谢等方面发挥了重要作用，推测其可能在溺死过程中发生改变。SP-A是由II型肺泡上皮细胞分泌的一种蛋白质，其通过与肺表面活性物质磷脂相互作用而发挥降低肺泡表面张力、防止肺泡过度膨胀或萎缩的作用。AQP-5是广泛分布于肺泡上皮和支气管上皮细胞的一种膜蛋白，研究显示其主要作用是清除肺泡腔内多余液体。关于这两种蛋白在不同原因死亡的研究主要以案例回顾性为主，针对溺死的研究及相关动物实验则较少。此外，国外学者溺死模型多采用麻醉后气道注水的方法，该方法在模拟真实溺死过程存在局限性。因此，关于AQP-5及SP-A在溺死中的研究仍需进一步深入研究。在溺死过程中，由于溺液进入体内使血液稀释可导致部分器官重量发生改变，因此，有学者认为可将器官重量作为鉴定溺死的指标之一。Hamann S等提出了溺死指数的概念，即肺脏、胸腔积液重量之和与脾脏重量的比值，但目前溺死指数尚未得到普遍认可和法医学应用。因此，本研究建立溺死大鼠动物模型，通过研究肺组织SP-A和AQP-5的分布和表达量，并结合肺组织的病理形态学改变、肺湿干比例以及主要脏器系数改变，来探讨这两种蛋白在溺死肺组织中的改变及其在法医学鉴定中潜在的应用价值。【材料和方法】将21只雌雄不限的SD大鼠完全随机分为溺死组、死后抛尸组和对照组。溺死组大鼠放入笼中沉入水中溺死；抛尸组大鼠先脱颈处死后抛入水中；对照组大鼠直接脱颈处死。取肺、肝、脾及双肾组织称重，并计算各脏器系数（脏器/体重比值）。肺组织标本分三部分检测，①取少量肺组织称重后放入85℃烘箱内烘烤24小时，待水分充分烘干后进行称重，以测量肺湿干比例。②肺组织经多聚甲醛固定后，制成石蜡切片，苏木素-伊红（HE）染色后进行组织学观察；③肺组织SP-A、AQP-5免疫组织化学染色观察；④通过免疫印迹技术（Western-Blotting）研究SP-A和AQP-5在肺组织中蛋白表达情况。【结果】（1）与抛尸组和对照组相比，溺死组肺湿干比例、肺脏器系数、肝脏器系数值显著高于其他两组（P＜0.01），而其他两组之间无显著性差异（P＞0.05）。三组之间肾脏器系数和脾脏器系数无显著性差异（P＞0.05）。（2）组织学观察显示，相较于对照组和抛尸组，溺死组可见明显肺气肿。各实验组之间均可见轻度的肺水肿。（3）SP-A在大鼠肺泡壁呈小片状表达，在支气管上皮细胞和巨噬细胞胞浆内呈颗粒样表达。溺死组表达强度弱于其他两组，以肺气肿区域表达最弱。（4）AQP-5表达位于肺泡上皮细胞、支气管上皮细胞以及少数血管内皮细胞顶膜。溺死组表达强度略弱于其他两组。（5）溺死组AQP-5及SP-A蛋白表达量显著低于其他两组（P＜0.01）；而抛尸组和对照组两组之间无显著性差异（P＞0.05）。【结论】（1）溺死大鼠肺气肿严重，肺、肝重量显著增加。其中，肺含水量增加参与了肺重量的改变。（2）SP-A和AQP-5蛋白在溺死大鼠肺组织中表达量均显著降低，其在法医学溺死鉴定中的潜在应用价值尚待深入研究。

全文目录

主要缩略语英文对照  6-7
摘要  7-10
ABSTRACT  10-13
第一部分溺死大鼠的病理形态学研究  13-22
  前言  13-15
  1 材料和方法  15-17
  2 实验结果  17-21
  3 讨论  21-22
第二部分溺死大鼠肺表面活性物质相关蛋白 A 及水通道蛋白 5 表达的初步研究  22-35
  前言  22-24
  1 材料和方法  24-28
  2 实验结果  28-33
  3 讨论  33-35
结论  35-36
综述  36-41
参考文献  41-50
在校期间参与课题和发表论文情况  50-51
致谢  51

溺死大鼠肺表面活性物质相关蛋白A和水通道蛋白5表达的初步研究

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