学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

ADSCs复合PRF和EPCs治疗小鼠放射性涎腺损伤的实验研究

作　者: 邢红艳
导　师: 刘彦普; 刘斌
学　校: 第四军医大学
专　业: 口腔医学
关键词: 涎腺再生组织工程涎腺放射性损伤动物模型脂肪来源干细胞血管内皮祖细胞模拟微重力旋转生物反应系统富血小板纤维蛋白
分类号: R782.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 5次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

[背景]：临床上常常因头颈部的肿瘤切除术、放疗术等造成涎腺的不可逆性损伤以及自身免疫性疾病等造成涎腺功能减退甚至丧失。涎腺分泌唾液机能减退和口腔干燥是最常见和最重要的并发症。其中放射治疗引起的涎腺功能减退占多数。头颈部癌症放疗后的长期幸存者，近64%的人发生中度到重度的口腔干燥症状[1]。涎腺唾液机能的减退可能导致各种各样的后遗症及其一系列的健康问题，如口腔干燥、吞咽困难、味觉改变或丧失、猖獗性龋齿和口腔念珠菌病等。最终,这些并发症可能导致患者营养不足和体重减轻，生活质量下降。此外,放射治疗引起的唾机能减退不仅影响患者的生活质量[2]，而且有些患者不得不因此而终止放疗，从而导致肿瘤无法继续有效控制[3-5]。而目前的治疗方法只能是对症治疗、缓解症状，并不能从根本上治疗这类疾病。[目的]：本实验通过给予放射性涎腺损伤小鼠模型局部注射ADSCs/PRF/EPCs复合物，寻求一种更安全、便捷、有效的促进受损涎腺修复的方法，为临床涎腺组织工程提供新的思路和实验依据。[方法]：（一）体外实验：采用消化法分离培养小鼠ADSCs，诱导培养EPCs细胞，并通过免疫荧光法、细胞表型流式细胞术鉴定、HE染色等方法对两种细胞进行鉴定；通过大体观察、扫描电镜对不同形状PRF的生物学特性做相关研究；同时通过RCCS系统对细胞进行扩大培养并用大体观察法、DiI染色法、HE染色法、扫描电镜法观察RCCS系统对细胞的作用；(二)体内实验：采用直线加速器18Gy局部照射建立小鼠涎腺放射性损伤模型；小鼠随机分成5组给予局部注射，通过体重变化、唾液流率、大体观察、组织学切片、细胞凋亡检测、透射电镜的方法，观察不同注射组小鼠颌下腺组织的变化情况。[结果]：（一）体外实验：1）小鼠ADSCs呈梭形，表达干细胞CD分子表型，具有成脂、成骨的分化潜能；2）诱导生成小鼠EPCs呈典型的上皮样结构，可以表达CD31，有类管腔样机构形成；3）凝胶状的PRF可以作为一种很好的天然支架材料，为细胞生长充当载体作用，并且可促进细胞增殖与分化；4）模拟微重力旋转生物反应系统相比于传统的培养方法能够更有效的促进细胞的增殖与分化，传统培养的倍增时间(3.62795±0.25936)天,旋转培养系统的倍增时间为(2.98975±0.10133)天，倍增时间更快（P <0.05）；（二）体内实验：1）放射后小鼠体重减轻，唾液流量减少，3个月后HE染色可见颌下腺组织结构破坏、几乎所有的腺泡细胞发生液泡化，间质有大量的单核细胞浸润。透射电镜观察可见，正常细胞结构受到破坏，细胞水肿变性，细胞核固缩，线粒体肿胀，内质网扩张，细胞质正常成分消失；2）通过对不同分组的3个月小鼠体重ADSCs组、PRF组、ADSCs/PRF组、ADSCs/PRF/EPCs组的体重分别是27.14±1.57g、29.45±1.65g、36.78±2.78g、39.86±2.42g较PBS组20.78±1.27g，P<0.05；其唾液流率分别为52.75±8.03μl/min、66.5±5.37μl/min、78.37±8.41μl/min、87.25±8.94μl/min较PBS组35.37±7.98μl/min，（P <0.05），唾液分泌延迟时间80±3.92s、81±5.57s、76±4.36s、72±3.22s较92±4.59s,（P <0.05）均有统计学差异；涎腺组织切片HE染色切片可见PRF/ADSCs/EPCs复合组中大部分细胞结构完整，未见明显的空泡样结构，有类似新生的腺泡和新生血管样结构生成；涎腺组织切片透射电镜观察，该组同样可见细胞基本完整，细胞膜和胞核清晰完整，细胞质中可见大量正常的细胞器，且该组细胞凋亡率为10.6±1.6%较PBS组53.6±3.4%具有显著统计学差异。与PBS对照组相比,小鼠的唾液量得到一定程度的恢复，各项指标均具有明显的统计学意义（P <0.05）；说明ADSCs/PRF/EPCs复合可以一定程度的保护和促进腺泡细胞的修复和再生。[结论]：（一）体外实验：1.成功地建立了小鼠ADSCs细胞系；2.成功将小鼠ADSCs体外诱导培养成为EPCs；3.成功地制备了PRF以及验证其作为天然生物支架材料和载体的可行性；4.微重力旋转生物反应器可以更有效的促进细胞增殖，为下一步的体内研究提供了丰富的种子细胞来源；（二）体内实验：1.成功地建立了小鼠涎腺放射性损伤的动物模型；2.局部注射ADSCs/PRF/EPCs能够有效恢复小鼠放射性损伤涎腺的功能。该方法具有材料来源广泛、操作方便、安全有效、对组织创伤小的特点。实验表明该复合注射组具有促进受损涎腺组织血管化，腺泡细胞修复，有效刺激小鼠的唾液流率，改善小鼠受损涎腺的修复。这种思路具有较广泛的应用前景，为涎腺再生组织工程的研究和临床预防和治疗涎腺损伤的应用研究提供了实验依据。

ADSCs复合PRF和EPCs治疗小鼠放射性涎腺损伤的实验研究

内容摘要

全文目录

相似论文