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沉默乳腺癌MDA-MB-231细胞MTDH基因对裸鼠移植瘤增殖转移的抑制作用

作　者: 王征
导　师: 梁庆模
学　校: 南华大学
专　业: 外科学
关键词: miRNA MTDH 乳腺癌移植瘤
分类号: R737.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：探讨乳腺癌MDA-MB-231细胞MTDH基因沉默对裸鼠移植瘤增殖转移的抑制作用及其机制。方法：选择SPF级雌性裸小鼠为实验动物,肿瘤造模所用的细胞株有乳腺癌MDA-MB-231细胞株,MTDH基因沉默了的MDA-MB-231/P细胞株,空载体转染的MDA-MB-231/PO细胞株。把15只裸鼠随机分为肿瘤组(乳腺癌MDA-MB-231细胞株)、实验组(MDA-MB-231/P细胞株)和对照组(MDA-MB-231/P0细胞株)三组。分别把三种不同细胞株注射到裸鼠右侧胸壁第二对乳腺下。第三周开始每三天测瘤体的长短径,了解瘤体体积变化。第八周处死裸鼠,切取肿瘤称重。取裸鼠体表肿瘤、腋窝淋巴结和肺部组织行病理学检查。RT-PCR检测裸鼠体表瘤体中MTDH mRNA的表达,Weston-blot检测瘤体细胞MTDH蛋白的表达,免疫组织化学检测裸鼠肿瘤中MTDH蛋白表达。结果：1.在相同的饲养条件下,实验组裸鼠与肿瘤组和对照组相比较,同时间点的实验组肿瘤体积明显较小,差异有统计学意义(P<0.01),而肿瘤组与对照组相比无显著性差异(P>0.05)。从各组裸鼠肿瘤生长曲线可以看出实验组肿瘤明显比另外两组生长缓慢,而肿瘤组和对照组在肿瘤生长速度上无明显差别。2.肿瘤重量：实验组与肿瘤组和对照组相比较,第八周处死裸鼠时实验组肿瘤重量明显减轻,差异有统计学意义(P<0.01),而肿瘤组与对照组相比无显著性差异(P>0.05)。3.体表肿瘤的病理结果显示,三组之间肿瘤细胞排列和生长方式以及肿瘤血管生长没有明显差别。4.腋窝淋巴结：HE染色后镜检,肿瘤组内5组腋窝淋巴结标本,18个淋巴结标本中10个转移,对照组16个淋巴结标本中8个转移,实验组18个淋巴结中2个转移。腋窝淋巴结转移率分别为：56%、50%和11%,实验组转移率明显低于肿瘤组和对照组(P<0.01),而对照组与肿瘤组阳性率比较无差别(P>0.05)。5.肺部组织HE染色后,肿瘤组内的5个肺标本中转移阳性的有1个,对照组2个为阳性,实验组标本转移阳性的有0个。6.应用RT-PCR分析了接种的三组裸鼠体表瘤体组织的MTDH mRNA的表达。与肿瘤组和对照组相比,实验组瘤体组织的MTDH mRNA表达水平下降,差异有显著意义(P<0.01),肿瘤组与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。7. Western blot法检测三组裸鼠瘤体组织中的MTDH蛋白表达量,与肿瘤组和对照组相比,实验组瘤体组织中的MTDH蛋白表达水平明显下降(P<0.01),肿瘤组与对照组MTDH蛋白表达水平相比无显著差异(P>0.05)。8.体表肿瘤的免疫组化：结果按照评分标准评价,肿瘤组内的5个标本的25个视野有18个为阳性,对照组有17个,实验组有4个为阳性,其平均阳性率分别为：72%、68%和16%。与肿瘤组和对照组比较,实验组MTDH蛋白表达阳性率明显降低(P<0.01),而对照组与肿瘤组MTDH蛋白表达阳性率无差别(P>0.05)。结论：1.MTDH基因沉默可以抑制裸鼠乳腺癌移植瘤的增殖转移；2.MTDH基因沉默可以抑制裸鼠乳腺癌组织中的MTDH基因和蛋白的表达。

沉默乳腺癌MDA-MB-231细胞MTDH基因对裸鼠移植瘤增殖转移的抑制作用

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