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SSTR2逆转EMT影响胰腺癌侵袭转移的研究

作　者: 张春霞
导　师: 申铭
学　校: 华中科技大学
专　业: 普通外科
关键词: SSTR2 EMT 胰腺癌侵袭转移
分类号: R735.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的探讨SSTR2基因对胰腺癌侵袭转移及EMT特性的影响。方法构建慢病毒3FLAG-puromycin-LV及SSTR2-LV，分别转染人胰腺癌细胞株Panc-1，用免疫荧光检测细胞转染效率，Real Time PCR检测转染后Panc-1细胞SSTR2的基因水平的表达，Western Blot检测转染后Panc-1细胞SSTR2的蛋白水平的表达。采用划痕实验、Transwell迁移实验和Transwell侵袭实验分别检测未转染病毒的胰腺癌细胞（空白对照组）、转染3FLAG-puromycin-LV的胰腺癌细胞（阴性对照组）和转染SSTR2-LV的胰腺癌细胞（实验组）侵袭转移能力的强弱。镜下观察转染前后胰腺癌细胞Panc-1形态的变化，并用免疫荧光检测转染前后胰腺癌细胞Panc-1上皮表型蛋白E-cadherin和间质表型蛋白vimentin定位表达差异，Western Blot检测转染前后Panc-1细胞上皮表型蛋白E-cadherin，β-catenin和间质表型蛋白N-cadherin，Vimentin定量表达差异。结果SSTR2-LV可以有效转染胰腺癌细胞株panc-1并稳定表达SSTR2的mRNA和蛋白，建立了稳定表达SSTR2的细胞模型。转染SSTR2-LV的胰腺癌细胞Panc-1较空白对照组和阴性对照组侵袭迁移能力明显受到抑制（P<0.01），而空白对照组和阴性对照组之间无明显差异（P>0.05）。镜下观察胰腺癌细胞Panc-1细胞转染SSTR2-LV后，由成纤维细胞样、排列分散，杂乱转变为细胞排列紧密如铺路石般，且有极性。免疫荧光可见Panc-1转染SSTR2-LV后细胞膜表达的E-cadherin荧光由胞浆转移至细胞周边浓聚，而Vimentin的荧光强度较前下降。用Western Blot进行蛋白定量分析，转染SSTR2-LV后胰腺癌细胞Panc-1上皮表型标志性蛋白E-cadherin，β-catenin表达量增高，间质表型标志性蛋白N-cadherin，Vimentin表达量减少，较空白对照组和阴性对照组差异具有统计学意义（P<0.05）。结论胰腺癌细胞Panc-1经转染SSTR2-LV后再表达SSTR2的mRNA和蛋白，可以增加上皮表型蛋白表达，减少间质表型蛋白表达，从而逆转胰腺癌细胞EMT,导致肿瘤细胞侵袭能力减弱。

全文目录

中文摘要  5-7
ABSTRACT  7-9
前言  9-12
材料和方法  12-21
结果  21-26
讨论  26-30
参考文献  30-32
综述 EMT 与肿瘤侵袭转移的关系  32-46
  参考文献  42-46
致谢  46

SSTR2逆转EMT影响胰腺癌侵袭转移的研究

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