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microRNA-146b-5p在弥漫大B细胞淋巴瘤患者风险评估中的意义

作　者: 曹其伟
导　师: 王晋芬
学　校: 山西医科大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 淋巴瘤大B细胞弥漫性 miR-146b-5p 免疫亚型预后细胞株慢病毒构建
分类号: R733.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：探讨hsa-microRNA-146b-5p（miR-146b-5p）的表达与弥漫性大B细胞淋巴瘤（diffuse large B-cell lymphoma，DLBCL）患者免疫亚型及预后的相关关系。方法：（1）收集山西医科大学附属省肿瘤医院病理科有详尽随访资料的DLBCL患者的石蜡样本62例，应用免疫组化EnVision法对所有样本进行CD20、CD3、CD10、bcl-6、Mum-1免疫标记，根据Han’s分类方法将DLBCL划分为生发中心B细胞（GCB)型和非生发中心B细胞（non-GCB）型；根据前期Agilent HumanmiRNA16.0高密度芯片对24例DLBCL患者的石蜡标本进行的预后miRNA表达谱筛选结果，采用qRT-PCR方法对所有样本进行miR-146b-5p表达水平的验证。11例淋巴结反应性增生为对照。（2）分别应用PCR方法从人基因组中扩增miR-146b-5p的前体片段，化学合成方法合成miR-146b-5p的类似物，并分别将其克隆入pGC-LV慢病毒表达载体中，经双酶切及测序鉴定,利用脂质体pofectamine2000将鉴定的阳性重组载体与辅助原件载体质粒pHelper1.0和pHelper2.0共同导入感受态细胞293T细胞进行慢病毒包装，使用逐孔稀释滴度测定法检测慢病毒滴度。（3）应用qRT-PCR方法检测人DLBCL细胞株DB、SUDHL-4、OCI-LY1、OCI-LY3、OCI-LY8、OCI-LY10、RJ-LY1和RJ-LY2中miR-146b-5p的表达情况。结果：（1）miR-146b-5p在DLBCL患者中的表达水平是淋巴结反性增生的5.4倍，差异有统计学意义（P=0.001）；62例DLBCL患者中，GCB型共22例（35.5%），non-GCB型共40例（64.5%），miR-146b-5p在GCB型患者中的表达水平明显高于non-GCB型，差异有统计学意义（P=0.006）；所有患者中，复发者35例（56.5%），无复发组患者miR-146b-5p的表达水平明显高于复发组，差异有统计学意义（P=0.004）。另外，DLBCL患者中miR-146b-5p高表达组（>中位值）的无复发生存(RFS)率明显高于低表达组(<中位值)，差异有统计学意义（P=0.005），miR-146b-5p的表达与患者的总体生存（OS）率没有明显相关性。多因素COX模型分析，显示miR-146b-5p低表达(<中位值）、国际预后指数（IPI）≥3分均为各自独立的预后不良因素。（2）成功构建miR-146b-5p过表达和抑制的重组慢病毒载体，经荧光表达和实时荧光定量PCR验证，成功包装出慢病毒。病毒滴度测定在1.0×109-1.5×109TU/mL之间。（3）miR-146b-5p在7种人DLBCL细胞株中的表达差异显著，在细胞株OCI-LY8（GCB型）中表达最高，在RJ-LY1(non-GCB型)中表达最低。结论：（1）DLBCL患者无复发组miR-146b-5p的表达水平明显高于复发组，并且miR-146b-5p高表达组RFS率明显高于低表达组，提示miR-146b-5p可能是DLBCL患者风险评估中的个新型分子标记；石蜡样本和细胞实验均表明miR-146b-5p在GCB型中的表达明显高于non-GCB型，提示miR-146b-5p可用于鉴别两种免疫亚型；成功构建miR-146b-5p过表达和抑制的慢病毒载体，为特异性过表达和抑制miR-146b-5p进行后续功能和靶向治疗研究奠定了实验室基础。

全文目录

中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
前言  9-11
第一部分 microRNA-146b-5p 在弥漫大Ｂ细胞淋巴瘤患者石蜡样本中的表达  11-23
  材料和方法  11-16
  实验结果  16-21
  讨论  21-23
第二部分 microRNA-146b-5p 慢病毒载体的构建  23-31
  材料和方法  23-28
  实验结果  28-30
  讨论  30-31
第三部分 microRNA-146b-5p 在人 DLBCL 细胞株中的表达  31-37
  材料和方法  31-35
  实验结果  35-36
  讨论  36-37
结论  37
参考文献  37-41
综述  41-49
  参考文献  47-49
附录  49-50
攻读学位期间发表文章情况  50-51
致谢  51-52
个人简介  52

microRNA-146b-5p在弥漫大B细胞淋巴瘤患者风险评估中的意义

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