学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

TRPC1在糖皮质激素抑制成年神经干细胞增殖中的作用与机理

作　者: 李茂全
导　师: 余争平
学　校: 第三军医大学
专　业: 劳动卫生与环境卫生学
关键词: 神经发生糖皮质激素 TRPC1 成年神经干细胞 CREB PI3K/Akt信号海马
分类号: R741
类　型: 博士论文
年　份: 2012年
下　载: 142次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

目的：糖皮质激素(Glucocorticoid，GC)是由肾上腺皮质分泌的一类具有神经活性的甾体激素，参与学习记忆的形成过程。研究证实GC是应激损伤、脑老化、神经退行性疾病等学习记忆功能障碍的重要发病原因之一。海马是GC损伤中枢神经系统的主要靶器官之一。文献报道GC显著抑制成年大鼠海马的神经干细胞的增殖，但机理有待深入探讨。外钙内流引起信号通路的激活调控神经发生的过程，TRPC1介导的外钙内流在胚胎干细胞的增殖中起重要作用。在成年神经干细胞TRPC1的表达未见报道。在中枢神经系统，CREB磷酸化调节成年海马神经发生的过程；PI3K/AKT信号参与神经干细胞的增殖过程，GC通过TRPC1通道对PI3K/AKT信号及CREB信号的影响如何，未见文献报道。因此，深入探讨GC损伤神经干细胞增殖的机理，将为GC损伤学习记忆功能的防治具有重要的理论和实际意义。方法：(1)成年神经干细胞的分离培养，用免疫组化方法进行鉴定，反映细胞具备的多向分化潜能，呈现出神经干细胞的特性；(2) CCK-8试剂盒和BrdU试剂盒检测GC对神经干细胞增殖的影响；(3)实时定量RT-PCR，Western blot检测TRPC1-7在神经干细胞上的表达信号分子CREB、Akt蛋白表达及磷酸化水平；(4)用激光共聚焦技术，将细胞负载fura-2后观测胞内Ca2+浓度；(5) shRNA靶序列的设计，慢病毒载体的构建和表达，观察TRPC1shRNA基因沉默对成年神经干细胞SOCE和增殖的影响；(6) TRPC1中和抗体拮抗TRPC1功能对成年神经干细胞SOCE和增殖的影响；(7)细胞周期分析和基因序列分析检测神经干细胞的细胞周期和基因表达；(8)免疫荧光染色方法，观测TRPC1/SOX2，TRPC1/Orai1/STIM1在成年神经干细胞的表达定位。结果：(1) GC抑制成年神经干细胞的增殖；(2) TRPC参与干细胞的增殖；(3) TRPC1在成年神经干细胞上表达；(4) TRPC1在成年海马SGZ区神经干细胞上表达，GC抑制TRPC1的基因表达；(5) SOCE存在于增殖的aNSCs。TRPC1、SOCE的拮抗剂2-APB、Gd3+以及SKF96365能够抑制TG介导的Ba2+内流和aNSCs的增殖；(6) TRPC1在增殖的aNSCs中表达，敲除TRPC1，抗体封闭TRPC1的功能明显的抑制SOCE以及aNSCs的增殖；(7)抑制TRPC1表达，G0/G1细胞周期的阻滞，TRPC1基因沉默的情况下，10个基因表达变化2倍以上，提示这些基因参与了TRPC1对aNSCs增殖的影响；(8) Orai1或STIM1参与了TRPC1介导的钙离子内流，敲除Orai1或STIM1后减少TG介导的Ba2+内流和aNSCs的增殖；(9)转入TRPC1基因可以恢复GC处理神经干细胞后引起的SOCE减少；(10) TRPC1干扰抑制p-Akt、p-CREB的表达，GC抑制Akt和CREB的表达。结论：(1) GC抑制成年神经干细胞的增殖；TRPC1在成年海马SGZ区的表达；(2) GC抑制TRPC1的基因表达，说明TRPC1参与了GC抑制成年神经干细胞的增殖过程；(3) SOCE存在于增殖的aNSCs，抑制TRPC1表达，神经干细胞在G0/G1期阻滞，TRPC1基因沉默的情况下，10个基因表达变化2倍以上，提示这些基因参与了TRPC1对aNSCs增殖的影响；(4) Orai1或STIM1参与了TRPC1介导的钙离子内流，敲除Orai1或STIM1后减少TG介导的Ba2+内流，抑制aNSCs的增殖；(5) GC处理成年神经干细胞，TRPC1介导的外钙内流进一步减少，转入TRPC1基因可以恢复GC处理神经干细胞后引起的SOCE减少； PI3K/Akt信号及CREB信号参与GC抑制海马成年神经干细胞增殖的过程。

TRPC1在糖皮质激素抑制成年神经干细胞增殖中的作用与机理

内容摘要

全文目录

相似论文