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防龋用转基因番茄和生菜中目的基因遗传传递的初步分析

作　者: 白朋元
导　师: 刘建国
学　校: 遵义医学院
专　业: 口腔临床医学
关键词: 转基因番茄遗传稳定性防龋疫苗变异链球菌 gus基因紧密连锁
分类号: R781.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 14次
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内容摘要

目的：在获得含目的基因pacA-ctxB、pacP-ctxB的转基因番茄T0、T1、T2、T3代种子和转基因生菜T0代种子的基础上,应用PCR技术、GUS染色技术对不同生长时期的转基因番茄后代植株进行跟踪检测,初步探索目的基因pacA-ctxB、pacP-ctxB在转基因番茄后代植株中的遗传稳定性,并对报告基因gus和目的基因pacA-ctxB、pacP-ctxB的连锁遗传进行初步分析,鉴定和筛选含目的基因的T1代转基因生菜植株。方法：本试验包括三部分第一部分：防龋用转基因番茄后代植株中外源目的基因稳定性检测提取转pacA-ctxB、pacP-ctxB基因番茄T1、T2、T3、T4代植株幼苗期、开花期、果实成熟期总DNA,利用PCR技术检测和鉴定含有外源目的基因pacA-ctxB、pacP-ctxB的转基因番茄植株,每代种植11株植株。第二部分：防龋用转基因番茄后代植株中报告基因gus和目的基因的连锁遗传1、采集转基因番茄和非转基因番茄植株幼根组织,通过组织化学染色定位法检测转pacA-ctxB、pacP-ctxB基因番茄后代群体T1、T2、T3、T4代植株中的gus基因。2、采集转基因番茄和非转基因番茄植株叶片提取总DNA进行PCR检测,筛选含外源目的基因pacA-ctxB、pacP-ctxB的转基因番茄植株。第三部分：防龋用T1代转基因生菜中目的基因pacA-ctxB、pacP-ctxB的检测提取转pacA-ctxB、pacP-ctxB基因生菜T1代植株总DNA,PCR法鉴定转pacA-ctxB、pacP-ctxB基因生菜T1代植株。结果：①提取含pacA-ctxB的T1、T2、T3、T4代转基因番茄总DNA进行PCR扩增,幼苗期每代转基因番茄植株分别有9、9、8、9株得到大小约为450bp的条带,与阳性对照一致,阳性检测率分别为81.8%、81.8%、72.7%、81.8%,开花期和果实成熟期检测结果与幼苗期一致。②含pacP-ctxB的T1、T2、T3、T4代转基因番茄幼苗期每代植株分别有9、8、8、7株得到大小约为506bp的条带,与阳性对照一致,阳性检测率分别为81.8%、72.7%、72.7%、63.6%,开花期和果实成熟期检测结果与幼苗期一致。③转pacA-ctxB基因番茄T1、T2、T3、T4代植株中分别有9、9、8、9株GUS染色为阳性,gus基因阳性株数与pacA-ctxB基因阳性株数完全一致,吻合率为100%,转pacP-ctxB基因番茄T1、T2、T3、T4植株中分别有9、8、8、7株GUS染色为阳性,gus基因阳性株数与pacP-ctxB基因阳性株数完全一致,吻合率为100%。④提取10株转pacA-ctxB基因生菜植株总DNA经PCR扩增、电泳后,有6株见约450bp扩增条带,与阳性对照一致；10株转pacP-ctxB基因生菜植株总DNA经PCR扩增、电泳后,有6株见约506bp扩增条带,与阳性对照一致,其余植株和正常对照植株未有扩增条带。结论：①外源基因pacA-ctxB、pacP-ctxB整合进番茄基因组中,并且能够在转基因番茄的后代中稳定的遗传。②报告基因gus和目的基因pacA-ctxB、pacP-ctxB在T-DNA中紧密连锁遗传,报告基因gus可用于研究pacA-ctxB、pacP-ctxB基因的遗传。③PCR法对转基因生菜植株进行检测,获得了含pacA-ctxB、pacP-ctxB基因的T1代转基因生菜植株。

防龋用转基因番茄和生菜中目的基因遗传传递的初步分析

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