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铝致SH-SY5Y细胞tau蛋白过度磷酸化的机制及p25/Cdk5相关信号通路的作用
作 者: 贾志建
导 师: 牛侨
学 校: 山西医科大学
专 业: 劳动卫生与环境卫生学
关键词: 铝 SH-SY5Y细胞 磷酸化tau蛋白 p25蛋白 p35蛋白 Cdk5
分类号: R114
类 型: 硕士论文
年 份: 2012年
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内容摘要
目的利用SH-SY5Y细胞研究铝致Tau蛋白过度磷酸化的机制,及p25/Cdk5相关信号通路在铝致tau蛋白异常磷酸化过程中的作用。方法1.培养SH-SY5Y细胞,建立铝诱导神经元损伤的细胞模型,实验分为空白对照组、200μMAlCl3组、400μMAlCl3组、800μMAlCl3组,染毒48h后,CCK-8试剂盒检测细胞活力;ELISA检测细胞总tau蛋白,Tau [pS396],Tau [pT231],Tau [pT181]的含量;Fluo3-AM标记细胞后,流式细胞术检测细胞内钙离子的浓度;Western-blot检测p25蛋白表达水平;Elisa检测细胞中钙蛋白酶,Cdk5的含量;2.采用Cdk5特异性的抑制剂Roscovitine拮抗Cdk5后,ELISA检测细胞总Tau蛋白,Tau [pS396],Tau [pT231],Tau [pT181]的含量分析其对Tau蛋白磷酸化的影响。结果1. CCK-8检测后显示,随着氯化铝作用浓度的增高,SH-SY5Y细胞活力逐渐下降,400μM AlCl3组,800μM AlCl3组细胞活力明显低于空白对照组(P<0.05),光镜下观察,随着氯化铝作用浓度的增高,SH-SY5Y细胞损伤也逐渐加重。2. Tau蛋白和磷酸化Tau蛋白结果显示:氯化铝染毒后,各组SH-SY5Y细胞总tau蛋白的含量没有差异;200μM AlCl3组,400μM AlCl3组,800μM AlCl3组细胞tau蛋白在Ser396,Thr231和Thr181位点的磷酸化水平明显高于对照组(P<0.05)。3. p25/Cdk5相关信号通路检测结果显示:随着氯化铝作用浓度增加,细胞内钙离子浓度明显升高(P<0.05);calpain的含量明显升高(P<0.05);800μM AlCl3组p25蛋白表达水平明显高于空白对照组(P<0.05);Cdk5的含量明显升高(P<0.05)4. Roscovitine拮抗Cdk5后,氯化铝导致的SH-SY5Y细胞Tau蛋白在Ser396,Thr231和Thr181位点的磷酸化水平均明显低于400μM AlCl3组(P<0.05)。结论1.氯化铝能降低SH-SY5Y细胞活力,对SH-SY5Y细胞有毒性作用。2.氯化铝能使SH-SY5Y细胞Tau蛋白在Ser396,Thr231,Thr181位点过度磷酸化。3.铝导致的SH-SY5Y细胞Tau蛋白过度磷酸化,其机制可能与p25/Cdk5相关信号通路有关,铝进入细胞后,升高细胞内钙离子浓度,提高钙蛋白酶含量,上调p25蛋白表达,激活Cdk5,导致Tau蛋白过度磷酸化。
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全文目录
中文摘要 5-6 Abstract 6-8 英文缩略语表 8-10 前言 10-15 参考文献 13-15 第一章 氯化铝对 SH-SY5Y 细胞 TAU 蛋白的影响 15-25 1 材料和方法 15-17 2 结果 17-21 3 讨论 21-23 参考文献 23-25 第二章 氯化铝对 P25/CDK5 相关信号通路的影响 25-33 1 材料和方法 25-27 2 结果 27-30 3 讨论 30-32 参考文献 32-33 第三章 CDK5 在氯化铝导致 TAU 蛋白过度磷酸化中的作用 33-41 1 材料和方法 33 2 结果 33-38 3 讨论 38-40 参考文献 40-41 小结 41-42 综述 42-48 参考文献 46-48 个人简历 48-49 致谢 49
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中图分类: > 医药、卫生 > 预防医学、卫生学 > 卫生基础科学 > 卫生毒理
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